辣椒应答疫霉的转录谱分析及相关候选抗病基因的cDNA分离

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:ffcsyangchh
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
辣椒疫病(Phytophthora blight)是由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici.Lone.)侵染引起的真菌性病害,是辣椒生产上一种毁灭性病害。研究辣椒疫病病原菌侵染诱导下的辣椒基因表达谱并分离、鉴定相关的候选抗病基因,对于阐明辣椒的抗病机制及其遗传改良具有重要意义。本研究运用cDNA-AFLP技术研究辣椒应答疫霉菌侵染的转录图谱,其中对363个衍生转录片段(transcript-derived fragment TDF)测序并进行了功能注释,从由辣椒叶片提取的总RNA构建的cDNA文库中筛选出3个全长cDNA,并对基因进行实时荧光定量PCR。主要结果如下:1、采用cDNA-AFLP技术,得到辣椒响应疫霉差异表达的转录谱,并对图谱中有差异变化的363个TDF测序,测序结果在NCBI上进行同源性分析,117个没有找到同源序列,246个找到了同源序列,比例为67.8%,对TDF差异表达情况进行分类发现无变化172个、各种下调(D)79个、早期上调(E)28个、晚期上调(L)7个、其它形式上调(I)77个。这些基因主要有:小GTP结合蛋白,钙依赖蛋白激酶,铁氧还蛋白,抗坏血酸还原酶,类调渗蛋白,亚精胺合成酶,细胞色素P450,油酸脱氢酶,过氧化物酶,蛋白质二硫键异构酶。2、采用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒,构建了辣椒响应疫霉cDNA文库,其滴度达到了1×106pfu/mL,重组率达到90%以上。3、采用基于PCR技术的96孔板cDNA文库筛选法,利用测序得来的基因片段设计引物,筛选cDNA文库获得了三个可能与抗病性密切相关:抗菌蛋白(EU401721)、Rubisco活化酶(EU401722)和硫堇蛋白(EU367112)的全长cDNA。测序结果表明,抗菌蛋白全长为645bp,含有长度为85个氨基酸的开放读码框,同源分析结果表明,所分离的cDNA与已发表的抗菌蛋白具有不同程度的同源性,抗菌蛋白(EU401721)与辣椒抗菌蛋白(AAL73184)同源性为98%,与苦瓜几丁质酶(ABD66068)的同源性为57%,与籼稻(ABU25226)几丁质酶的同源性为60%,与银合欢(AAM49597)几丁质酶的同源性为53%;Rubisco活化酶长度为1741bp,含有长度为439个氨基酸的开放读码框,同源分析结果表明,Rubisco活化酶(EU401722)与西红柿(AAC15236)Rubisco活化酶的同源性为92%,与马铃薯(ABX84141)Rubisco活化酶的同源性为81%:硫堇蛋白(EU367112)长度为608bp,含有长度为91个氨基酸的开放读码框,同源分析结果表明,硫堇蛋白与辣椒(AAF16413)硫堇蛋白的同源性为71%,与辣椒(AF112443)硫堇蛋白的同源性为71%。4、应用实时荧光定量PCR,对三个候选基因在辣椒疫霉菌作用下的cDNA-AFLP分析结果进行验证,并研究了它们在辣椒疫霉、UV-B、JA、SA、JA+SA、NaCl、4℃低温和机械损伤等逆境或外源激素作用下的表达,结果表明:荧光定量的实验结果与cDNA-AFLP的实验结果基本一致。抗菌蛋白表达量较为显著的是NaCl处理的12h和机械损伤的24h,疫霉侵染后则在60h达到最大,Rubisco活化酶基因是紫外线处理对其影响最大,硫堇蛋白基因与辣椒应答激素密切相关,疫霉侵染辣椒植株后硫堇蛋白基因表达量逐渐增强。本研究结果对于辣椒抗疫霉的分子机制剖析及差异表达TDF相应基因在辣椒应答疫霉侵染中的可能作用研究奠定了基础。
其他文献
[摘 要]要想有效提高学员问题意识培养的效果,教员就要努力结合不同教学组织形式,系统筹划培养学员问题意识的方法途径。本文从理论教学和实践教学两种教学组织形式入手进行了一定的途径探析。  [关键词]军校;学员;问题意识  所谓问题意识,是指个体在认识活动中遇到一些难以解决的、疑惑的实际问题或理论问题时所产生的不断提出问题、不断解决问题的意向和愿望。问题意识在个体的思维过程和科学创新活动中占有非常重要
《公差》是《公差配合与技术测量》的简称,之所以这样简称是因为在学生中流传着这样一句话:《公差》《公差》所有人都差,意思就是没一个人能学好这门课。从中我们也体会到学生学这门课的感受。正因为如此,有些中职学校在课改时将这门课删减掉不开了,近几年来,由于市场需求,这门课又才重新开设起来。据我多年来上这门课的体会,我觉得上好这门课,让学生听懂、爱学。对一个老师来说主要注意以下几个方面:  一、通览教材,注
期刊
【摘 要】身为数学教师都知道计算能力的重要性。计算能力是每个学生必须具备的一项基本能力,培养学生计算能力是小学数学教学的一项重要任务,是学生今后学习数学的重要基础。那么,如何进行低年级学生计算能力的培养呢?  【关键词】计算能力 低年级 算理 口算训练 计算习惯  身为数学教师都知道计算能力的重要性。计算能力是每个学生必须具备的一项基本能力,培养学生计算能力是小学数学教学的一项重要任务,是学生今后
我们一般认为,数学的能力,分为两种水平:一种是独立创造具有社会价值的数学新成果的能力;一种是在数学学习过程中,学习数学的能力。中学阶段,我们应该培养学生怎样的数学能力呢?无疑首先应该培养学生的“数学学习能力”.培养学生的数学探索能力,是一项系统的工程,它包含了许多方面,以下是我在教學实践中,培养学生数学探索能力的几点尝试,它包括培养兴趣、指导方法、鼓励质疑、鼓励创新等几个方面。  一、培养数学兴趣
期刊
【摘 要】 班主任是班级建设的主帅,是促进学生健康成长的骨干力量。班主任的主要工作就是学生工作。本文将讨论如何承担班主任职责并有效的管理好学生。  【关键词】 班主任 学生管理  班主任是学生班集体的组织者、领导者;是联系学生和各科教师之间的纽带;也是沟通家庭、学校之间的桥梁。为此,做好班主任工作,促进孩子健康成长是每一位班主任应该而且必须履行的职责。也值得我们探讨和研究。我将结合我这些年来的教学
沈阳防锈包装材料有限责任公司成立于1989年,是我国最大的气相防锈包装材料研究与生产企业,也是依靠专利技术实现跨越式发展的高新技术企业.2008年,公司实现营业收入34181万/
随着我国现代建设步伐加剧,经济飞速发展,越来越多的青壮年农村剩余劳动力外出打工,为了生计只能将子女留在老家由父辈们照顾,这些孩子们在同学们中就成了特殊群体——"留守学生".他们本该父母双方共同生活,同享天伦之乐,健康快乐地成长,但由于父母双方出外务工,他们不得不留在家中,他们由于缺少父母的关爱和监督,无法享受到同龄孩子的爱和快乐,生活和心理都面临着问题。怎样才能使这些孩子有一个正常、健康的心理,让
期刊
[摘 要]关注个体道德成长的学校道德教育,必须着眼于个体日常生活中的行为准则的正当性和必要性。对于学校道德教育实效性,社会普遍认为很不理想。究其问题的关键,主要在于老师和学生的沟通不到位,从而造成“老师忙死,学生烦死”的局面。本文就以优化德育课程设计出发,探讨一下德育课程的实施过程,以提高学校德育的实效。  [关键词]素材 方式 实效  一、优化德育课程素材  教师在学生的教育过程中既是引导者也是
【摘 要】以教材的高效整合,高效梳理,高效设计建构立体式,大容量,快节奏的结构框架;以教学资源辐射的思维量、信息量、训练量建构高效课堂的知识技能脉络;以教学活动的趣味性,创造性,生成性引领身动、心动、神动的体验探究式活动途径;以学生的肯学、乐学、会学的情感态度及价值观建构高效率、高效益、高效果的实践目标,实现知识的意义、能力的意义,生长的意义。  【关键词】解读 构建要素 建构策略  行走在不断创
鸡西矿业集团公司张辰煤矿西三采区3