脑动脉瘤是一种严重威胁人类健康的脑血管病，其破裂出血常常导致病人致残、致死。虽然近年来显微外科手术和神经介入方法治疗脑动脉瘤取得了极大的进步，但依然有很大的手术危险性。因此，加强对脑动脉瘤发病机制的分子生物学研究，寻求控制脑动脉瘤生长的干预措施以减少脑动脉瘤破裂出血造成的严重后果具有十分重要的意义。先前的研究认为脑动脉瘤形成是由于脑动脉壁长期遭受血流冲击致使维持脑动脉壁韧性的主要结构内弹力膜破坏的结果，新近的研究进一步表明内弹力膜破坏与细胞外基质代谢平衡障碍有关。基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase, MMPs）是一类主要的分解细胞外基质的蛋白酶，其活化及抑制在控制细胞外基质降解过程中起着重要作用，其中明胶酶（MMP-2、MMP-9）及其特异性抑制物（Tissue inhibitors of metalloproteinases, TIMPs）与脑动脉瘤形成的关系最为密切。核因子-κB （nuclear factor-κB, NF-κB）是一种具有基因转录调节作用的蛋白质因子，它可介导许多细胞因子表达，广泛参与了机体的炎症反应、细胞增殖和凋亡。通过对MMPs基因结构分析发现，在MMPs基因启动子近端调控区有特异性的NF-κB结合位点，去除NF-κB结合位点后可抑制各种刺激诱发的MMPs升高。目前，人们还不清楚在脑动脉瘤形成过程中NF-κB与MMPs的表达变化规律及其相互关系。为此，我们应用肾性高血压大鼠脑动脉瘤模型，分别在基因表达及蛋白水平观察脑动脉瘤形成过程中NF-κB和MMPs的动态变化及其相互关系，继而用MMPs抑制剂doxycycline和NF-κB抑制剂雷公藤内脂醇进行干预实验，并对doxycycline和雷公藤内脂醇抑制脑动脉瘤发生的作用加以评价，为寻求预防和延缓脑动脉瘤发生发展的药物提供理论依据。本实验共包括五个部分。<WP=6>1 实验性肾性高血压大鼠脑动脉瘤模型的建立及超微结构研究应用改良的Hashimoto方法，通过光镜和电镜组织学观察，对持续四个月肾性高血压大鼠脑血管的早期病理改变与脑动脉瘤形成的关系加以探讨，从而为高血压性脑动脉瘤的防治提供理论依据。50只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为两组，其中实验组40只和对照组10只。动物采用3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，利用改良的Hashimoto法，开腹后在显微镜下分离出双侧肾动脉后支予以电凝。术后一周，再将左侧颈总动脉电凝后切断，并用1%盐水取代饮水以增加高血压程度。对照组行模拟手术以作对照。术后1、3天、1、2、3周、1、2、3、4月分别测量大鼠尾动脉收缩压。4月后，动物以4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液灌注处死，开颅取脑，在解剖显微镜下仔细观察颅底动脉环及其主要分支并将其剥离，随后置于2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液中后固定24小时。标本经环氧树脂包埋，沿血管分支纵轴行半薄和超薄切片，半薄切片经甲苯胺蓝染色供光镜观察；超薄切片经醋酸铀－枸橼酸铅染色供透射电镜观察。结果显示40只形成稳定的肾性高血压大鼠，有2只形成了肉眼可见的脑动脉瘤，一个位于右侧（颈总动脉非电凝侧）ACA－OA分叉部，另一个位于右侧ACA主干，10只在右侧ACA－OA分叉部可见动脉壁轻度隆起。镜下可见两种组织学改变，一种是动脉瘤前改变，包括内膜垫变钝，分叉部远端内弹力膜出现分层、变细，平滑肌细胞大小不一，排列紊乱；另一种是动脉瘤样改变，包括两种亚型即镜下动脉瘤性外突和半梭型动脉瘤形成，两种动脉瘤样改变以前者居多，且多位于ACA－OA分叉部动脉外侧壁内膜垫远端。镜下动脉瘤性外突的组织学改变有分叉部血管内膜垫消失，或仅存留一个残基；该处内弹力膜或突然中断消失，或逐渐分层、变薄、消失，或仅可见破碎的内弹力膜片段；动脉瘤壁平滑肌细胞大小不一，排列紊乱，细胞核固缩，细胞间质增多，平滑肌层细胞层数减少，明显变薄，有的仅剩下一层；外膜较正常血管壁稍增厚，伴有纤维组织增生。半梭型动脉瘤的组织学改变表现为内膜垫、内弹力膜完全消失；血管肌层平滑肌细胞消失，纤维细胞增生；外膜增厚，血管壁呈动脉瘤性扩张，血管内壁凹陷，有附壁血栓形成。电<WP=7>镜观察早期的动脉瘤样改变表现为血管壁内皮细胞肥大或萎缩，表面欠光滑，部分细胞内出现空泡变性，内皮细胞间隙增宽，部分区域有内皮细胞脱落或分层现象，偶见白细胞、血小板附着于内皮细胞小凹及细胞间隙处；内弹力膜在动脉瘤入口处突然终断消失，或者逐渐分层、变细、消失，被疏松结缔组织取代，部分区域仍可见破碎的内弹力膜片段；平滑肌层细胞大小不一，排列紊乱，胞浆减少，细胞壁表面的密区及小凹消失，部分线粒体呈反染，并可见变性坏死的平滑肌细胞，细胞间隙增大、间质增多，为疏松结缔组织及成纤维细胞充填，成纤维细胞胞浆内粗面内质网扩张，功能活跃；外膜组织较正常血管致密，有纤维组织增生。晚期的动脉瘤壁更加薄弱，瘤壁厚薄不一，内皮细胞消失，可见纤维蛋白沉积物，正常的内弹力层与平滑肌层被纤维结缔组织替代，动脉瘤壁凹凸不平，可见附壁血栓形成。 本研究应用光镜、电镜对早期肾性高血压大鼠脑动脉瘤模型进行组织学观察结果表明，肾性高血压脑动脉瘤的发生率为30％，多位于ACA－OA分叉部，与文献报道一致；首次指出内膜垫的变化与动?