芝麻素协同吉西他滨对人肺腺癌A-549细胞株的影响

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目的:观察芝麻素(Sesamin)及联合吉西他滨(Gemcitabine)作用于人肺腺癌A-549细胞株有何影响。方法:选用人肺腺癌A-549细胞株进行体外培养,应用MTT比色法测定芝麻素、吉西他滨及芝麻素联合吉西他滨对人肺腺癌A-549细胞株的抗增殖作用。通过倒置显微镜和Hoechst33258荧光染色观察芝麻素、吉西他滨及芝麻素联合吉西他滨作用人肺腺癌A-549细胞株后细胞凋亡的形态学变化。应用流式细胞术对芝麻素、吉西他滨及芝麻素联合吉西他滨作用人肺腺癌A-549细胞株的细胞凋亡进行定量分析及检测细胞胞内Ca2+浓度变化。利用免疫细胞化学染色于光学显微镜下观察,人肺腺癌A-549细胞株caspase-3、8、9的表达。结果:①MTT比色结果表明,低浓度的芝麻素对人肺腺癌A-549细胞株有一定的增殖抑制作用,各浓度组吉西他滨均具有抑制人肺腺癌A-549细胞株的作用,并随着药物浓度的增加呈现抑制率的增高趋势,芝麻素联合吉西他滨较单独应用吉西他滨对A-549细胞株抑制率明显增强,P<0.01,差异具有统计学意义;②倒置显微镜和Hoechst33258荧光染色进行形态学观察,倒置显微镜下观察发现芝麻素组、吉西他滨组和联合组均可见到贴壁细胞数量较对照组明显减少,细胞贴壁不牢、脱壁漂浮,部分细胞出现体积缩小、呈小圆球状细胞,细胞间连接消失,并与周围细胞发生脱离现象,可见到细胞碎片,失去原有肿瘤细胞多角形或梭形形态,肿瘤细胞生长受到抑制,且联合组较吉西他滨组抑制肿瘤细胞形态学改变显著,Hoechst33258荧光染色后于荧光显微镜下观察发现细胞核浓缩,细胞核染色质高度凝聚、边缘化,其中芝麻素联合吉西他滨较单用吉西他滨上述表现明显;③流式细胞仪检测细胞早期凋亡率结果显示,药物作用48小时后,芝麻素组、吉西他滨组及联合组均较对照组早期凋亡率升高,且芝麻素联合吉西他滨组较单用吉西他滨组早期凋亡率升高显著[对照组(3.75±0.10%),芝麻素组(12.40±0.52%),吉西他滨组(13.32±0.71%),联合组(26.59±0.76%);芝麻素组和吉西他滨组分别与对照组比较,P<0.05;联合组与对照组比较,P<O.01;芝麻素组与吉西他滨组比较,P=0.71;联合组与吉西他滨组比较,P<0.01];④通过流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度水平得知,药物作用48小时后,芝麻素组、吉西他滨组及联合组均较对照组细胞内Ca2+浓度水平增高,且联合组较吉西他滨组细胞内Ca2+浓度水平增高显著[对照组(2.16±0.11),芝麻素组(12.11±0.67),吉西他滨组(15.46±0.97),联合组(54.72±3.56);芝麻素组和吉西他滨组分别与对照组比较,P<0.05;联合组与对照组比较,P<0.01;联合组与吉西他滨组比较,P<0.01];⑤免疫细胞化学染色发现,药物作用48小时后,实验组Caspase-3、8、9表达均较对照组升高,且联合组较吉西他滨组Caspase-3、8、9表达升高显著[Caspase-3表达,对照组(8.31±0.49%),芝麻素组(21.81±0.67%),吉西他滨组(46.97±3.26%),联合组(61.48±1.04%),芝麻素组、吉西他滨组和联合组分别与对照组比较,P<0.01,联合组与吉西他滨组比较,P<0.01];[Caspase-8表达,对照组(6.56±0.76%),芝麻素组(20.73±0.55%),吉西他滨组(48.16±1.27%),联合组(57.72±1.19%),芝麻素组、吉西他滨组及联合组分别与对照组比较,P<0.01,联合组与吉西他滨组比较,P<0.05];[Caspase-9表达,对照组(7.21±1.25%),芝麻素组(24.73±1.53%),吉西他滨组(49.12±1.17%),联合组(59.45±0.93%),芝麻素组、吉西他滨组及联合组分别与对照组比较,P<0.01,联合组与吉西他滨组比较,P<0.05)]。结论:(1)低浓度的芝麻素对人肺腺癌A-549细胞株有一定的增殖抑制作用;(2)芝麻素与吉西他滨联合作用人肺腺癌A-549细胞株具有显著的抑制率和协同抗恶性肿瘤细胞作用;(3)芝麻素可通过提高人肺腺癌A-549细胞株胞内钙离子浓度,且可增强吉西他滨提高人肺腺癌A-549细胞株胞浆内钙离子浓度的作用从而诱导细胞凋亡;(4)芝麻素有参与Caspase通路的激活,而且可以增强吉西他滨激活Caspase家族的能力,诱导肿瘤细胞凋亡。
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