基于酶反应放大的DNA生物传感分析及单分子分析

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本文采用了ICP-MS检测分析方法,制备了修饰有捕获探针的纳米金生物条码,建立了基于DNA分子机器与酶循环放大技术和基于DNA分子信标的特异性识别技术的方法,实现了对基因等肿瘤标志物的高灵敏,高选择性检测:采用了全内角反射荧光成像技术,利用滚环扩增将目标DNA放大增长,将单个目标DNA进行荧光成像,实现了对目标基因的检测。主要内容如下:1.构建了一种以ICP-MS检测技术为基础的三联放大系统,通过剪切链置换、滚环扩增和生物条码探针,来检测目标DNA。通过这个方法,乙肝炎病毒的检测限能达到3.2×10-17M。单错配碱基的序列也能很好的被分辨。此外,我们能证明该方法能很好的应用于复杂的生物样品检测,在生物医学领域有着广阔的前景。2.全内反射荧光显微镜(total internal reflection fluorescence microscope, TIRF)是一门比较复杂的光学技术,目前已被科学家们广泛应用,现如今已经发展成为探测细胞-基底接触区域内细胞生命活动最强有力的方法。将目标DNA滚环扩增,然后将其产物固定在玻璃板上,运用光镊将末端修饰有聚苯乙烯微球的稍作移动,这样做的目的是将PCR扩增的产物在拉力的作用下变为一条直线,再用与其DNA互补的荧光DNA进行杂交,最后运用TIRF来观察基底的情况。全内反射荧光显微技术作为单分子成像的一种新兴技术,必将更好的为我们对肿瘤标志物的检测带来帮助。
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