紫色马勃的发酵工艺、化学成分及药效学研究

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目的:分离和筛选出紫色马勃的优良菌株;对筛选得到的紫色马勃菌株进行生物学特征研究,掌握其菌丝体生长所需的营养和环境条件;测定紫色马勃子实体和发酵产物中主要的化学成分含量,为其质量评价奠定基础;研究紫色马勃发酵产物对胃溃疡以及肝损伤的预防保护作用,探讨其作用机制,为其药用价值的开发和应用奠定基础。方法:分离纯化出紫色马勃优良菌株,对其生物学特性进行考察;通过单因素考察和正交试验优化紫色马勃液体发酵工艺,确定液体培养基的成分组成和培养条件。利用苯酚-浓硫酸法,测定紫色马勃发酵产物中多糖的含量;利用香草醛高氯酸显色反应测定紫色马勃发酵产物中总三萜的含量;通过HPLC法测定紫色马勃子实体和发酵产物中麦角甾酮以及麦角甾醇的含量;通过束缚水浸致小鼠应激性胃溃疡模型以及酒精致小鼠急性肝损伤模型,研究紫色马勃发酵产物对应激性胃溃疡以及急性肝损伤疾病的预防作用及其机制。结果:经过分离、纯化得到紫色马勃的优良菌株,生物学特性研究表明最适合紫色马勃菌丝生长的培养基配方为葡萄糖浓度2%、酵母粉浓度1%、MgSO4浓度0.1%,最适初始pH值6.5,最适培养温度30℃;紫色马勃液体深层发酵工艺研究表明,紫色马勃液体发酵的最适培养基为麦芽糖4%,酵母粉3%,KH2PO40.1%,初始pH值6-7,最适培养温度30℃,培养天数为6天;苯酚-硫酸法测定紫色马勃发酵液中多糖含量为17.71%,菌丝体中多糖的含量为2.14%;香草醛高氯酸显色反应测定紫色马勃菌丝体中总三萜的含量为2.50%;利用HPLC测定菌丝体中麦角甾醇的含量为4.97mg/g、麦角甾酮的含量为11.86μg/g,子实体中麦角甾醇的含量为5.88mg/g、麦角甾酮的含量为56.73μg/g;束缚水浸致小鼠应激性胃溃疡实验中,紫色马勃发酵产物降低了胃组织中MDA水平和胃蛋白酶活性,升高胃组织中SOD和NO水平,降低血清中TNF-α和IL-6水平,并下调NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白水平的表达;酒精致小鼠急性肝损伤实验中,紫色马勃发酵产物降低了血清中AST和ALT水平,降低了肝脏组织中MDA水平、TB水平和炎症因子IL-18、IL-1β、TNF-α水平,升高了肝脏组织中SOD水平。结论:分离、纯化得到了紫色马勃的优良菌株,对其进行生物学特性研究,优化其发酵工艺,为之后的紫色马勃菌丝工业化生产提供基础;通过测定紫色马勃子实体及发酵产物中各主要成分的含量,为其质量评价提供依据;应激性胃溃疡实验中,紫色马勃发酵产物通过下调NLRP3蛋白和衔接蛋白ASC的表达,抑制效应蛋白Caspase-1的活化,减少机体的炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6的释放,进而有效预防小鼠应激性胃溃疡的形成;在急性肝损伤实验中,紫色马勃的发酵产物通过调节炎症因子水平和氧化应激反应,从而对急性肝损伤小鼠起到保护作用。
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