显齿蛇葡萄品质评价及其相关药效学研究

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显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata (Hand-Mazz)W.T.Wang,系葡萄科蛇葡萄属的藤本植物,具有清热解毒、利湿消肿的功效,主治咽喉肿痛、目赤肿痛、黄疸型肝炎等症。本研究为了更全面地评价显齿蛇葡萄药材质量,筛选优良无性系,测定不同显齿蛇葡萄无性系及其不同药用部位中的有效成分的含量,并对其抗氧化活性及抗炎镇痛进行研究,以了解显齿蛇葡萄中有效成分含量差别与其相关药效间的关系。本论文主要分为六个部分,主要内容如下:1.以总黄酮、二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素为指标,采用星点设计-效应面法优化显齿蛇葡萄的超声提取工艺。最终确定了最优工艺为30倍量65%乙醇超声提取30min。2.通过紫外分光光度法测定不同无性系及不同季节显齿蛇葡萄中总黄酮、总酚、多糖的含量,HPLC法测定显齿蛇葡萄中二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素的含量,建立多个指标质量分析体系。结果表明,不同显齿蛇葡萄无性系间各指标的含量存在较大差异,且叶子中各指标含量远远大于茎中的含量。结合主成分聚类分析结果,将12个不同显齿蛇葡萄无性系分为3类。不同季节各指标的含量测定结果显示,显齿蛇葡萄无性系中各指标含量变化趋势基本一致,除多糖外各指标含量春夏季比秋季要高,采摘显齿蛇葡萄应在4-6月较为合适。3.建立不同显齿蛇葡萄无性系HPLC指纹图谱共有模式,标定了13个共有峰,对其峰面积进行主成分分析,抽取了3个主成分。根据三个主成分的综合得分聚类分析结果分成3类,与前面通过6个指标聚类的结果一致。4.采用GC-MS技术对显齿蛇葡萄样品叶和茎中挥发油成分进行分析。从叶中鉴定出40种化合物,占挥发油总量的62.64%,从茎中鉴定出26种化合物,占挥发油总量的50.64%,其中共有成分有11个。初步确定了叶和茎中的香气成分,并分析叶和茎中各自的香气成分差异,为改善显齿蛇葡萄制品—藤茶的口感提供依据,并且为综合开发利用显齿蛇葡萄资源提供实验依据。5.利用DPPH及ABTS两个体外抗氧化模型,评价不同显齿蛇葡萄无性系叶和茎的提取液及二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素的体外抗氧化能力。结果表明,不同显齿蛇葡萄无性系叶和茎提取液及二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素均存在较强的抗氧化能力,且存在一定差异,叶的抗氧化能力强于茎。由相关性分析结果得知,不同显齿蛇葡萄无性系半数清除率(IC50)与总黄酮、总酚、二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素的含量均存在极显著负相关,以总黄酮的相关性最高。6.以二甲苯致小鼠耳肿胀及醋酸致小鼠扭体两个模型探讨不同等级显齿蛇葡萄无性系的抗炎镇痛活性。结果表明,显齿蛇葡萄提取物具有一定的抗炎镇痛活性,其中等级“好”(AG-5)的抗炎活性最好,等级“中”(AG-3)的镇痛活性最好。不同无性系及剂量间抗炎镇痛活性存在差异,应根据药材指标成分含量大小控制合理的使用量。
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