【摘 要】
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目的:观察组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)siRNA对膀胱癌RT112细胞HDAC1基因、PTEN基因及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的影响和对其凋亡影响,并对其可能机制进行初步的讨论。方法:体外培养人
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目的:观察组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)siRNA对膀胱癌RT112细胞HDAC1基因、PTEN基因及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的影响和对其凋亡影响,并对其可能机制进行初步的讨论。方法:体外培养人类膀胱癌RT112细胞,实验分4组,空白对照、HDAC1-control组、HDAC1-siRNA组和SAHA处理组。设计了2条HDAC1-siRNA序列和1条无关序列,构建HDAC1-siRNA重组质粒,分别转染RT112细胞,选取转染效率最高的HDAC1-siRNA-2序列进行后面的实验。流式细胞术检测各组细胞凋亡率变化,四组处理的细胞分别提取mRNA和蛋白质,采用Real-time PCR技术检测HDAC1、Bax、Bcl-2基因mRNA水平,采用Westernblot技术检测HDAC1、PTEN、Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果:(1)与对照组相比,HDAC1-siRNA和SAHA组在mRNA水平上,HDAC1表达下降,Bcl-2下调,Bax没有显著差异;在蛋白水平上,HDAC1下调,Bcl-2下调,PTEN上调,Bax没有显著差异;(2)流式细胞术分析HDAC1-siRNA和SAHA在不同程度上促进RT112细胞凋亡。结论:1、构建的HDAC1-siRNA重组质粒可以在体外干扰RT112细胞HDAC1mRNA和蛋白的表达。2、HDAC1-siRNA重组质粒可以诱导RT112细胞的凋亡,可能与上调组蛋白乙酰化的水平,促抑癌基因PTEN表达和下调Bcl-2/Bax的比值有关。
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