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目的本研究对羟乙基淀粉在兔自体肾移植缺血再灌注模型肾组织沉积的情况及其对肾脏功能的影响进行观察，以证实羟乙基淀粉是否会对移植肾功能造成损伤，探讨新型羟乙基淀粉用于肾移植手术过程中液体治疗的可行性。材料与方法选择成年龄新西兰大白兔18只，雌雄不拘，体质量1.8～2.6千克。随机分为3组，万汶组（V组，n=6）、盈源组（Y组，n=6）和生理盐水对照组（S组，n=6）。按公斤体质量2mg·kg-1氯胺酮肌内注射麻醉动物，行右侧耳缘静脉穿刺置管并以3 mg·kg-1·h-1速度静脉输注氯胺酮维持麻醉。以8ml·kg-1·h-1速度输入乳酸林格氏液，补充生理需要量和体液损失量，行颈动脉切开，插入22G肝素化套管，即时监测动脉血压。兔自体原位肾移植缺血再灌注模型的建立：行腹部纵行切口，游离左侧肾，暴露腹主动脉，完全游离肾动脉、静脉至起始部。游离右侧肾至肾蒂，穿过1号丝线2根备用。采用无创伤动脉夹从左肾动脉起始部夹闭动脉，选用24G套管针于左肾动脉穿刺置管，同时夹闭肾静脉远端，根据肾静脉的直径和角度选用合适的套管针于左肾静脉穿刺置管以备引流灌注液，形成肾局部灌注循环通路。以10～15毫升0～4℃肝素化的HCA保护液恒压灌洗（压力为60～80mmHg，该过程中热缺血时间约为3min），灌洗过程中自肾周向肾门轻轻抚摩肾脏，至色泽变白、肾静脉流出液清澈后停止灌洗，灌洗完毕后将肾脏置于0～4℃的低温水囊中保存。拔除左肾动静脉置入的导管，以7-0无损伤缝合线缝合穿刺针孔。左肾动脉阻断、灌注、低温保存60分钟后，先后松开左肾静脉及动脉的动脉夹，使左肾血流复灌。观察复灌肾脏血运良好后切除右侧肾脏，建立模型成功，缝合腹部切口。处理因素：自体移植缺血再灌注模型肾复灌后即刻开始进行如下处理：V组以20 ml·h-1的速度开始静脉输注剂量为10 ml·kg-1的6％羟乙基淀粉130／0.4氯化钠注射液（万汶），Y组则以20 ml·h-1的速度输入10 ml·kg-1剂量的6％羟乙基淀粉200／0.5氯化钠注射液（盈源），S组以20 ml·h-1的速度输入10 ml·kg-1剂量的生理盐水。输注完毕后停止静脉输注氯胺酮，复灌后2小时拔除颈动脉留置导管，结扎该侧颈动脉以止血，缝合颈部切口，待其苏醒后放饲养笼内饲养。采集数据、标本、检验、或标本处理：分别记录建立模型手术开始（T1）、肾动脉阻断即刻（T2）、肾动脉阻断后10min（T3）、自体移植肾复灌即刻（T4）、复灌后2h（T5）等各个时点的收缩压（SBP）、舒张压（DBP）和脉率（P）。建立模型手术开始前（Ta）、肾复灌后2h（Tb）及24h（Tc）分别采集血标本2ml，待血标本凝固析出血清后离心，取血清检测尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。自体移植缺血再灌注模型。肾复灌后24h经兔耳缘静脉注入空气20ml，迅速处死实验兔，剖开腹部，切取肾脏，沿肾脏外侧缘纵切，将肾脏分成两半，在任一半下极切取一厚0.3～0.5cm包括皮质、髓质的扇型组织块，浸入4％多聚甲醛PBS缓冲固定液中固定。固定24小时后冲洗去除固定液，依次浸入乙醇脱水、二甲苯透明后浸蜡，浸蜡完全后把组织块转移至溶解的石蜡中包埋，将包埋好的组织块切为3～6μm的组织片，分别贴在普通载玻片和免疫组织化学防脱片上，37℃烤干，普通载玻片组织切片常规HE染色，观察组织结构，盲法阅片，采用Paller氏标准评分半定量评价肾小管病变程度。免疫组织化学防脱组织切片进行免疫组织化学实验。免疫组织化学实验：免疫组织化学防脱组织切片依次浸入两道二甲苯脱蜡，彻底脱蜡后依次水化、去除内源性过氧化物酶、抗原热修复，滴加正常山羊血清封闭液封闭20分钟，滴加新鲜配制的兔抗-羟乙基淀粉多克隆抗体工作液后湿盒置于37℃温箱中孵育1小时，滴加新鲜配制的辣根酶标记羊抗兔IgG工作液，湿盒置于37℃温箱中孵育40分钟，新配制DAB显色剂显色10～20分钟，在显微镜下掌握染色程度，蒸馏水洗终止染色，苏木素复染、盐酸乙醇分色，脱水、透明、封片、烤干、镜检。实验过程中设置阴性对照片以排除假阳性反应，即在实验过程中对照片不滴加新鲜配制的兔抗-羟乙基淀粉多克隆抗体工作液，而是以0.02M PBS缓冲液取代，进一步确定染色不是其它干扰因素所致。采用CoolSNAP-Procf成像系统拍照镜检图片，从Y组和V组每个标本切片所拍摄图片中随机抽取5张图片，使用Image-Pro Plus 5.0软件进行图像分析，计算DAB染色颗粒的面积。统计学处理：所有计量资料以均数±标准差（（?）±s）表示，先行方差齐性检验，体质量、基础血压、心率、尿素氮、肌酐、Paller氏评分等指标采用单因素方差分析进行处理，各个时点的血压、心率、尿素氮、肌酐组内比较、组间比较、两两比较和多重比较采用重复测量数据的方差分析进行统计学处理，DAB染色颗粒面积采用独立样本t检验进行统计学处理。所有数据均使用SPSS13.0统计学软件进行处理，P＜0.05为差异有显著意义。结果各组新西兰大白兔的体重、基础血压、脉率、尿素氮、肌酐等各项指标差异无统计学意义（P＞0.05）。各组内手术期间所监测收缩压、舒张压、脉率比较差异有统计学意义（P＜0.05），组间比较差异无统计学意义（P＞0.05），收缩压、舒张压、脉率与组别之间无交互作用。尿素氮监测结果各组内比较差异有统计学意义（F=287.663，P=0.000），组间比较差异有统计学意义（F=12.676，P=0.001），尿素氮的结果受组别因素的影响（F=8.511，P=0.003）；多重比较结果如下：肾动脉复灌后2小时的尿素氮结果V组与Y组比较差异有统计学意义（P=0.007），肾动脉复灌后24小时的尿素氮结果V组与Y组比较差异有统计学意义（P=0.001），与S组比较差异有统计学意义（P=0.000），V组尿素氮值在肾动脉复灌后2小时、24小时两个时点的均值都低于S组和Y组的均值。肌酐监测结果各组内比较差异有统计学意义（F=60.283，P=0.000），组间比较差异无统计学意义（F=2.178，P=0.148），肌酐的结果不受组别因素的影响（F=287.663，P=0.250）：各组组织形态学观测指标Paller氏评分组间比较差异有统计学意义（F=10.431，P=0.001）；其中多重比较V组低于Y组（P=0.012），S组低于Y组（P=0.000）各组形态学改变：S组肾脏组织的结构，可见近端小管上皮细胞轻度肿胀，远端小管管腔扩张，部分细胞可见胞浆内空泡形成，组织周围有渗出；Y组肾脏组织的结构，可见近端小管上皮细胞肿胀、胞浆内大量空泡形成，远端小管管腔扩张，部分细胞可见胞浆内空泡形成，组织周围有大量渗出；V组肾脏组织的结构，可见近端小管上皮细胞肿胀、胞浆内空泡形成，远端小管管腔扩张，部分细胞可见胞浆内空泡形成，组织周围有渗出。免疫组化结果：S组DAB显色阴性；Y组DAB显色阳性，多见于近端小管上皮细胞，显色的颗粒并不多；V组DAB显色阳性，多见于近端小管上皮细胞，显色的颗粒也不多；实验阴性对照片DAB显色阴性。V组免疫组化镜检图片DAB染色颗粒每张总面积与Y组比较差异有统计学意义（t=2.538，P=0.015），V组均值（226.87μm2）低于Y组均值（508.51μm2）。结论1、兔自体肾移植时缺血再灌注对兔肾脏组织造成损伤，使用6％羟乙基淀粉200／0.5氯化钠注射液维持血容量时自体移植肾组织损伤比较严重，而使用6％羟乙基淀粉130／0.4氯化钠注射液维持血容量时自体移植肾组织损伤较小，基本上没有在缺血再灌注损伤的基础上进一步造成肾损伤。2、羟乙基淀粉用于扩充血容量时会在自体移植肾缺血再灌注模型肾组织沉积；6％羟乙基淀粉200／0.5氯化钠注射液在肾脏的沉积量高于6％羟乙基淀粉130／0.4氯化钠注射液。3、6％羟乙基淀粉200／0.5氯化钠注射液对自体移植肾缺血再灌注模型肾脏功能的影响大。6％羟乙基淀粉130／0.4氯化钠注射液对自体移植肾缺血再灌注模型肾脏功能影响较小。