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目的⑴建立可靠的体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)的方法,观察其生物学特征,为瘢痕疙瘩的体外实验构建平台。⑵研究盐酸氨酮戊酸光动力法(ALA-PDT)对KFB增殖的抑制作用,初步探讨ALA-PDT对瘢痕疙瘩的作用机理,为临床预防和治疗瘢痕疙瘩提供理论依据。⑶研究ALA-PDT对KFB凋亡的影响,分析凋亡过程中Caspase3、8、9表达的水平,对凋亡通路进行初步探讨。方法⑴采用组织贴壁法进行体外瘢痕疙瘩的成纤维细胞的培养,并进行传代,观察其生物学特征,并采用免疫细胞化学法进行成纤维细胞的鉴定。⑵将体外培养的KFB,分别加入含ALA0.5mmol/l、1.0mmol/l、2.0mmol/l、4.0mmol/l、8.0mmol/l浓度的DMEM培养液,避光培养5h后,用光动力仪照射,能量密度1~64J/cm2,CCK8检测KFB的活性,计算其增殖水平。⑶将体外培养的KFB,加入含ALA4.0mmol/l浓度的DMEM,避光培养5h,光动力治疗仪照射,能量密度32J/cm2,测试其Caspase3、8、9的表达水的变化。结果⑴组织贴壁法培养成纤维细胞,接种后5天可以见到组织边缘有细胞萌出,培养3~4周后可以传第一代,对第3~5代成纤维细胞进行波形蛋白免疫细胞化学染色,可见瘢痕疙瘩成纤维细胞胞浆内大量棕黄色颗粒,核为蓝色,波形蛋白为阳性。⑵照射能量在>8.0J/cm2时,随着ALA浓度和照射剂量增加,对细胞的抑制作用也增强。⑶ALA-PDT能同时增强Caspase-3、8、9的活性,表达水平上升。结论⑴组织贴壁法培养成纤维细胞,操作简单,节约成本且能获得活性高、纯度高的成纤维细胞,可以作为瘢痕疙瘩体外实验的研究。⑵本实验表明ALA-PDT对KFB的增殖具有明显抑制作用,ALA浓度和激光的能量是影响细胞存活率的重要因素。⑶ALA-PDT能够诱导KFB的凋亡,其凋亡发生与Caspase-3、8、9活性密切相关,表明Fas信号通路和线粒体通路共同参与了KFB的凋亡过程。