中华蜜蜂MAPEG家族成员AccMGST1和AccMGST2在抗氧化过程中的功能分析

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中华蜜蜂是我国特有的蜜蜂品种,在农业经济发展、生态稳定中发挥重要作用。然而,随着环境问题日益严重,中华蜜蜂不断遭受逆境胁迫带来的危害,其生存受到严峻考验,蜂群数量锐减。探究中华蜜蜂的抗氧化分子机制,对于提高其生存能力、维护种群发展具有重要意义。MAPEG家族是一个能够介导炎症因子合成的超家族,其家族成员MGST1、MGST2分别在脂质过氧化保护、氧化应激通路的调控中具有重要作用。因此,本研究利用分子生物学研究技术和方法,探究了中华蜜蜂中AccMGST1和AccMGST2两个基因在逆境胁迫中的抗氧化分子机制和作用机理。主要结果如下:通过RT-PCR的方法首次分离AccMGST1和AccMGST2基因,并利用生物信息学方法对其生物学特征进行分析。结果表明,AccMGST1基因的编码区序列长450 bp,编码一个由149个氨基酸组成的多肽,其相对分子质量为17.143 kDa,等电点为9.74,结构上由α-螺旋构成跨膜三聚体;AccMGST2基因的编码区序列长462 bp,编码一个由152个氨基酸组成的多肽,其相对分子质量为17.517 kDa,等电点为8.33,结构上由α-螺旋构成跨膜三聚体。AccMGST2与意大利蜜蜂AmMGST2的氨基酸序列相似度达96.08%。通过qRT-PCR技术对AccMGST1和AccMGST2的组织特性进行研究,结果表明,AccMGST1基因在表皮中的表达量较高,在头、腹部以及肌肉中的表达较低,而AccMGST2基因在头部、肌肉中表达量较高。通过qRT-PCR技术对AccMGST1和AccMGST2在非生物应激中的表达特性进行研究。结果表明,AccMGST1和AccMGST2的表达可以响应不同非生物应激带来的氧化胁迫。而Western blot检测进一步验证AccMGST1在蛋白水平对不同非生物应激导致的氧化胁迫的响应。通过抑菌实验及DNA保护实验探究了重组AccMGST1蛋白的功能,结果表明,重组AccMGST1蛋白不仅可以协助大肠杆菌抵抗过氧化氢异丙苯的氧化损伤还可以减轻DNA双螺旋结构遭受的氧化损伤。通过RNA干扰沉默AccMGST1和AccMGST2基因,初步分析它们在抗氧化中的作用。结果表明,沉默AccMGST1基因后,相关抗氧化基因的表达量升高。而沉默AccMGST2基因后,部分MAPK基因及抗氧化基因的表达量降低。这些结果表明AccMGST1具有氧化防御的功能,而AccMGST2参与调控中华蜜蜂的氧化应激。
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