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目的:探讨槲皮素对宫颈癌Hela细胞的辐射增敏效应及抑制侵袭、转移的作用,探讨辐射增敏作用与给药时序、药物浓度的影响,探讨槲皮素放射增敏及抑制转移可能的机制。方法:(1)MTT法检测槲皮素单独作用以及12Gy的X射线与槲皮素联合作用时对Hela细胞增殖的抑制作用,绘制出细胞抑制率曲线,计算槲皮素对Hela细胞作用的IC50值。(2)克隆形成实验观察不同给药时序、不同药物浓度的槲皮素对宫颈癌Hela细胞的放疗增敏作用,比较单独放射以及药物与辐射联合后细胞的成瘤能力,确定最佳给药时序并观察药物浓度对放射增敏的影响。(3)流式细胞法检测槲皮素、放射线单独以及联合作用后Hela细胞的周期分布及凋亡率情况。(4)光镜及DAPI染色分别观察不同处理后Hela细胞的凋亡变化。(5)划痕实验和Transwell体外侵袭实验分别观察射线及槲皮素对Hela细胞的迁移和侵袭能力的影响。(6)Western-blot法检测槲皮素、放射线单独以及联合应用后Hela细胞中Bcl-2、Bax、VEGF、MMP-9蛋白的表达。结果:(1)不同浓度的槲皮素对Hela细胞均呈量效性和时效性的生长抑制作用;不同浓度槲皮素联合12Gy剂量射线共同作用后,Hela细胞的增殖进一步受到不同程度的抑制,并具有浓度和时间依赖性。计算出24小时槲皮素对Hela细胞的IC50值约为120μmoL/L。考虑临床常规放疗剂量的实用性及参考文献资料,后续试验中选取的放疗剂量为4Gy,槲皮素选取高、低两个浓度进行比较(20%的IC50值和IC50值)。(2)在先药后放及先放后药两种不同时序下,单独放射与射线联合槲皮素作用,均能抑制Hela细胞集落形成,联合组抑制作用更加明显,先放后药比先药后放时序的抑制效果更加具有优势,因此,在后续试验中采用先放后药作用时序。(3)槲皮素与放射线均能使细胞周期阻滞于放射敏感的G2/M期,放射线与槲皮素联合作用比单独作用效果更加显著。(4)光镜下观察射线单独作用后,细胞的形态无明显的变化,槲皮素单独作用后,细胞间隙变宽,细胞形态不规整,呈不同程度的皱缩,槲皮素联合射线处理后,细胞形态变化更加明显,间隙进一步增宽,细胞变圆、皱缩,且高浓度槲皮素作用的细胞形态改变更加显著;DAPI染色后,射线及槲皮素均可引起细胞核不同程度的皱缩,二者合用后,大量细胞核皱缩、碎裂,高浓度药物作用细胞核变化更加显著。(5)射线照射24h后细胞迁移与侵袭能力增加,槲皮素对HeLa细胞的迁移与侵袭有抑制作用,槲皮素与射线共同处理细胞后,与空白组及单放组比较仍具有明显的抑制迁移作用。(6)Western blot法检测各处理组Bax、Bcl-2、VEGF、MMP-9蛋白表达情况,结果表明槲皮素单药,以及联合放射线均能升高Bax蛋白的表达,降低Bcl-2蛋白的表达;射线单独作用后VEGF、MMP-9蛋白表达在一定时间内略有增加,槲皮素处理后VEGF、MMP-9蛋白表达降低,二者共同处理后VEGF、MMP-9蛋白表达较空白组与单放组降低。结论:(1)槲皮素及X射线均能抑制Hela细胞增殖。(2)槲皮素对Hela细胞具有放射增敏作用,并有浓度、时序的依从性。(3)射线在一定时间内可能促进Hela细胞的迁徙转移,槲皮素则可抑制Hela细胞放疗后的迁移与侵袭。(4)槲皮素对Hela细胞的放疗增敏作用可能与细胞凋亡的发生、G2/M期阻滞、下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白表达有关。(5)槲皮素抑制Hela细胞放疗后的迁移与侵袭可能与下调VEGF、MMP-9蛋白表达有关。