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目的:本研究通过体内外实验探讨柞蚕抗菌肽抗瘤效果,及其作用机理。 方法:1.柞蚕抗菌肽对CNE2细胞毒性作用。以鼻咽癌最常用的有效化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照,采用MTT比色法检测柞蚕抗菌肽对CNE2细胞株的细胞毒性作用;Annexin V/PI双标法,测定CNE2细胞的凋亡率;抗微管蛋白单克隆抗体检测CNE2细胞骨架结构的变化;透射电镜观察CNE2细胞超微结构的改变。 2.柞蚕抗菌肽对荷瘤裸鼠抗瘤作用。建立荷人鼻咽癌细胞株CNE2的裸鼠模型,随机分为4组,柞蚕抗菌肽通过腹腔注射和局部注射两种途径进行治疗干预实验,以注射生理盐水为阴性对照组和注射5-FU为阳性对照组。每天1次,连续用药3天,用药后第10天取血计数白细胞,处死动物,称量裸鼠肿瘤大小,比较抑瘤率,取裸鼠肿瘤组织作常规病理切片观察,了解柞蚕抗菌肽对肿瘤的治疗效果,取裸鼠心脏、肝脏、肾脏作常规病理观察,了解柞蚕抗菌肽对裸鼠的毒性作用。 结果:1.体外实验结果:柞蚕抗菌肽对CNE2细胞的杀伤作用有明显的剂量效应关系,浓度越高、时间越长抗菌肽对CNE2细胞的抑制率越高(P<0.01),300μmol/L抗菌肽作用72h细胞抑瘤率可达到84.78%。柞蚕抗菌肽作用72h的IC50为222μmol/L。抗菌肽的抑瘤率低于5-FU(P<0.01)。作用24h、48h 300μmol/L抗菌肽可以达到和75μmol/L 5-FU基本相似的抑瘤率(P>0.05),作用72h300μmol/L抗菌肽细胞抑瘤率高于75μmol/L 5-FU(P<0.01)。凋亡率随抗菌肽第一车伍人学Ig[*叮究生论义 作用浓度的增加而相应增加,在作用48小时左右达到高峰,作用 超过72小时后有所降低。免疫组织化学染色见抗菌肽处理后细胞 骨架分休不均匀,形态不规则,散乱,卷缩;透射电镜下观察经柞 蚕抗菌肽处理后的肿瘤细胞结构发生明显变化,细胞膜破损,细胞 器内容物泄出胞外,线粒体出现广泛性电子密度减低,肿胀、峭断 裂;可见部分凋亡细胞,异染色质边聚,细胞核中央常染色质疏松, 细胞器基本正常。 2.体内实验结果:柞蚕抗菌肽对荷人鼻咽癌CNEZ裸鼠治疗效果明 确而肯定。三个治疗组与正常对照组相比较均有显著差异o刃刀1), 柞蚕抗菌肽局部治疗组与5fU治疗组相比较无显著差异o>0刀5), 柞蚕抗菌肽两组间比较有显著差异尸刃.01卜腹腔组柞蚕抗菌肽。 局部组柞蚕抗菌肽和 5fU抑瘤率分别为 59.26O石2.61O和 83.23O。 常规病理切片观察,5FU处理组瘤组织内出现大片状出血坏死灶伴 有少量淋巴细胞浸润;柞蚕抗菌肽腹腔处理组瘤组织内出现小片状 出血坏死灶伴有少量炎细胞浸润;柞蚕抗菌肽局部处理组癌瘤大面 积出血坏死,坏死区内及残存癌细胞周围较多炎细胞浸润呈包围 状,可见到淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞浸润,以淋巴细胞为 主。柞蚕抗菌肽治疗后裸鼠心脏、肝脏、肾脏未见明显病变,外周 血白细胞无明显下降。结论:柞蚕抗菌肽具有较明显的抑制人鼻咽癌的作用,并且无明显毒副 作用,是一种较理想的新型抗肿瘤药物。