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猪的繁殖性状,尤其是产仔性状,是影响现代养猪业经济效益的重要因素之一。猪的繁殖过程主要依赖于垂体-下丘脑-性腺轴的调控,这个过程还受到许多基因与环境相互作用。近年来,关于猪的miRNA研究逐渐增多,但是对于猪繁殖性状的研究相对较少。通过文献报道和我们实验室已有的成果,我们发现miR-429、miR-143、miR-145对哺乳动物的繁殖性状可能有重要的调控作用;而且在雌性小鼠的垂体中已经证实miR-429可以通过下调E盒结合锌指蛋白1(E-box-binding homeobox 1,ZEB1)基因的表达来上调促黄体生成素β(luteinizing hormone beta polypeptide,LHβ)基因的表达,从而影响雌鼠的排卵过程。由于miRNA在哺乳动物中具有高度的保守性,所以这些miRNA的调控作用及分子机制可能在猪上也存在。因此本试验通过荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、双荧光素酶报告基因、电泳迁移率(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)等实验技术,主要研究了miR-429和与miR-429调控相关的靶基因(ZEB1和LHβ)及miR-143-3p、miR-145-3p在大约克夏猪和皖南黑猪高、低产仔数母猪生殖轴组织(垂体、下丘脑、卵巢、子宫、输卵管)中的表达规律及miR-429、ZEB1和LHβ三者间的靶向调控关系,从而探究miR-429调控母猪产仔性状的分子机制。取得了下列结果:1.miR-429和与miR-429调控相关的靶基因(ZEB1和LHβ)、miR-143-3p、miR-145-3p等在母猪的生殖轴组织的表达规律:miR-429在母猪的垂体和输卵管中高表达,LHβ只在猪垂体中表达较高,ZEB1在猪生殖轴组织中广泛表达,miR-143-3p和miR-145-3p在子宫,卵巢,输卵管中表达较高。2.miR-429和与miR-429调控相关的靶基因(ZEB1和LHβ)、miR-143-3p、miR-145-3p在大约克夏猪和皖南黑猪高、低产仔数母猪生殖轴组织的表达差异:在垂体中,miR-429、LHβ的表达量高产组均显著高于低产组,而ZEB1的表达量高产组均显著高于低产组;在子宫中miR-143-3p和miR-145-3p的表达量高产组均显著低于低产组。由结果可知:miR-429、miR-143-3p和miR-145-3p可能对猪的产仔性状产生影响;miR-429、ZEB1和LHβ三者之间可能存在靶向调控关系。3.miR-429和ZEB1之间的靶向关系:通过在293T细胞中进行的双荧光素酶实验,我们发现转染pmr-mcherry载体的实验组荧光值极显著高于转染pmr-mcherry-ssc-miR-429载体的实验组(P<0.01)。说明ssc-miR-429在ZEB1的3’UTR区域有结合位点,ssc-miR-429可能靶向调控ZEB1。4.ZEB1和LHβ之间的靶向关系:根据EMSA结果,T1和T2的胶孔中均出现DNA探针与目的蛋白结合并迁移的条带,说明在猪中转录因子ZEB1能与LHβ基因的启动子区域发生互作,转录因子ZEB1和LHβ之间可能存在靶向关系。综上所诉,miR-429、miR-143-3p和miR-145-3p可能影响母猪的产仔性状;而miR-429在猪的垂体中可能通过下调ZEB1基因的表达从而间接上调LHβ基因的表达,来调控母猪的产仔性能。