柑桔是脍炙人口的南国水果，因其营养丰富，色、香、味俱佳，既可生食，又可加工，深受广大消费者的欢迎。随着人民生活水平的提高，柑桔的消费结构正在发生质的转变，消费开始趋向于高档次，高品质和多样化，从而为品种改良提出了更多、更高、更新的要求。但是柑桔的遗传育种，受到多胚性、珠心胚的干扰。从全球来看，近几年的柑橘品种结构和组成没有多大的变化，发达国家主要集中于以基因工程和细胞工程为重点的生物技术育种。由于柑橘植物遗传基础复杂，本身存在的一些有利基因难于直接分离提取，大多是利用别的物种的基因进行遗传转化实验，导致柑橘生物技术育种的进程相对较为缓慢。因而，寻找新的生物技术育种方法仍具有很大的理论与实际意义。 在茎尖嫁接苗的嫁接部位会产生愈伤组织和以一定的几率萌生不定芽，我的导师王永清教授在利用茎尖嫁接脱毒时注意到了这一现象。我们在参考大量文献的基础上，经过理论推理和论证，认为嫁接部位产生的愈伤组织和不定芽很有可能融合两亲本的性状，产生新的材料。因此，我们着手从实践上给予论证。本研究旨在探索利用茎尖微芽嫁接法在无菌条件下获得体细胞融合体的可行性。试验以柑橘类中的枳、酸柚、椪柑的组织培养苗为试材进行茎尖微芽嫁接，然后对取自嫁接部位的愈伤组织和不定芽进行离体培养，以期从中筛选出体细胞杂种或者嫁接嵌合体，从而为植物育种提供一种新的生物技术方法。本试验着重研究以下几个方面： (1)在三种嫁接方式(顶接、倒“T”字型接、椅接)中哪一种更有利于试验的快速进行和试验材料的获得。因此对嫁接成活率、嫁接部位愈伤组织的发生量、不定芽的发生率进行了统计。 (2)对用于嫁接的接穗用激素进行处理，看是否会对嫁接产生显著影响。 (3)由于从嫁接部位获得的材料很少，而且这时也不可能在大田中直接栽植，因此需要对获得的材料进行离体培养，探求合适的激素配方，建立新材料的快速繁殖体系。 (4)对获得的新材料进行鉴定，以初步判断该方法的可行性。本试验在实施过程中采用以下的技术路线:材料‘(砧木)、、盏之护愈伤组织(嫁接部位)岌 /户7嫁接植株、/了丛芽材料2(接穗)不定芽(嫁接部位)甚赵电卜嫩枝迷翱卜体细胞杂种或嵌合体·丰脱·》小植株·····……卜盆栽苗 图1采用微型嫁接法获得体细胞杂种的技术路线注:实线为已完成部分 本试验在材料的离体培养中采用了正交设计，在材料的鉴定中采用的是形态学鉴定。试验结果表明: (l)试验适宜材料为暗培养两周左右的幼苗，接穗为幼苗茎尖。新材料的组织培养条件为:培养温度25士2℃，光照时间14h/d，光照强度ZOO0hix左右，pH值为5.8左右。 (2)在几种嫁接方式中，以椅接的嫁接成活率最高，倒“T”字型接居中，顶接最低;但从试验材料的获得、嫁接速度等方面整体考虑，以顶接方式更适合于本试验的进行。 (3)三种激素(BA、KT、IBA)处理接穗都能提高嫁接成活率、愈伤组织发生量、不定芽发生率，且在一定的范围内随着激素浓度的升高而升高，其中BA对提高嫁接成活率效果更好一些，KT则对提高愈伤组织发生量、不定芽发生率效果更好。 (4)愈伤组织的增殖培养:取自嫁接部位的愈伤组织在增殖时，以Ms+0.sm留L BA+0 .sm留LIBA+0 .2m留L NAA效果最好，60天后增殖量最多可达57.1 mg。 (5)愈伤组织的再分化:对增殖的愈伤组织进行再分化形成从生芽，以Ms+o.smg/LB扮1.omg/L KT+o.lmg/L IBA效果最好，60天后分化率可达57.2%。 (6)不定芽的增殖:以MS+0.5m留L BA+0.2m叭KT+o.lm留LNAA最佳，60天后，增殖系数可达11.5。 (7)鉴定:根据形态特征对获得的不定稍进行了鉴定，发现了一株同时具有三出复叶、二出复叶和单身复叶的幼苗;一株同时具有三出复叶和单身复叶的幼苗;四株同时具有二出复叶和单身复叶的幼苗。初步看出这六株幼苗是有别于亲本的新材料，表明茎尖微芽嫁接技术可以作为一种新的体细胞融合和生物技术育种方法。至于哪些是体细胞杂种、哪些是嫁接嵌和体，有待进一步通过分子标记或其他方法进行鉴定。