α-糖苷酶抑制剂产生菌的筛选、分类鉴定及其发酵培养基的优化

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:angelgsj
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糖尿病已经成为威胁人类健康的三大疾病之一,流行病学的研究表明,餐后血糖水平是引起糖尿病人大血管并发症和微血管并发症的重要因素,这些并发症是引起糖尿病死亡率增大的一个主要原因。所以,严格控制餐后血糖对糖尿病的防治具有非常重要的意义,而能够显著降低餐后血糖水平的α-糖苷酶抑制剂类药物具有很大的应用价值。放线菌是土壤中种类和数量庞大的一个微生物类群,是人们筛选新型天然化合物的宝库。近几年来,从放线菌发酵液中寻找α-糖苷酶抑制剂的研究越来越得到人们的到重视。本研究旨在筛选到一株新的有较强α-糖苷酶抑制效果的放线菌,近而确定该菌株的分类地位,优化该菌株的发酵培养基,以提高该菌株发酵液中α-糖苷酶抑制剂的活力,为今后分离活性化合物及其性质研究打下基础。本研究采用稀释倒平板法从江西九江等地采集的土壤中分离出520株放线菌,并对这些放线菌进行了纯化。将上述放线菌通过α-淀粉酶抑制剂筛选模型得到20株抑制率在75%以上的菌株。进而将这20株放线菌通过蔗糖酶抑制剂筛选模型,从中筛选出了10株抑制率在30%以上的菌株。经过多次复筛,选择菌株7(1)。该菌株发酵液对α-淀粉酶、蔗糖酶的抑制活性分别为85%和41%。采用多相分类的方法对菌株7(1)进行了菌种鉴定。采用PCR技术将α-糖苷酶抑制剂产生菌7(1)的16SrDNA基因序列进行扩增,扩增结果与Genebank中已报道的16SrDNA基因序列进行比对,结果发现与多株链霉菌属的菌株具有高度同源性(99%)。结合该菌株的形态特征,培养特征和生理生化反应,判定菌株7(1)为天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)该菌株Genebank编号AB184196.1。利用单因子试验和正交设计试验对菌株7(1)的发酵培养基进行优化。确定优化后的碳源为5 g·100mL-1的蔗糖和5g·100mL-1的糊精组合成的复合碳源,氮源为8g·100mL-1的生化蛋白胨,pH为7.0。此发酵培养基条件下酶抑制剂的活力(95.4%)较原培养基(85%)提高了10%。
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