第一部分：吉西他滨联合PD-1抗体对小鼠肺肿瘤的治疗作用
　　目的：
　　观察吉西他滨对荷肺肿瘤小鼠髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSC)数量及其功能的影响，及吉西他滨联合PD-1抗体治疗肺肿瘤的疗效。
　　方法：
　　将Lewis肺腺癌细胞注射于C57BL/6小鼠皮下建立移植瘤模型，流式细胞仪分析外周免疫器官脾脏中MDSC的数量及其IL-4R、CD31和MHCI的表达强度；共培养经磁珠分离纯化的脾脏T淋巴细胞和MDSC，以ConA作为刺激剂，分析MDSC的精氨酸酶活性和一氧化氮产物水平，MTT法分析MDSC对T淋巴细胞增殖能力的影响，ELISA法检测IFNγ水平进而分析MDSC对T细胞功能的影响。用绵羊红细胞作为抗原免疫荷瘤小鼠，通过检测抗体产生水平分析荷瘤小鼠体液免疫反应；在此基础上，通过过继细胞转移实验分析MDSC与荷瘤小鼠体液免疫反应的变化有无关联。将吉西他滨腹腔注射小鼠，通过流式细胞术检测分析用药前后脾脏中MDSC及各型淋巴细胞的比例，利用CBA试剂盒检测荷瘤小鼠应用吉西他滨后MDSC相关炎性因子分泌水平。将荷瘤小鼠分为四组进行下述治疗：单用吉西他滨、单用抗PD-1抗体、吉西他滨联合抗PD-1抗体和生理盐水对照，观察各组肿瘤生长情况，分析吉西他滨对抗PD-1抗体治疗肺癌疗效的影响。
　　结果：
　　1)3LL肿瘤诱导脾脏中MDSC聚集，MDSC可通过Arginase1和iNOS途径抑制T淋巴细胞的增殖和IFNγ分泌。
　　2)3LL荷瘤小鼠的抗体生成能力强于正常小鼠，这种增强的体液免疫反应与脾细胞中积累的MDSC有关。
　　3)吉西他滨可选择性清除脾脏中的MDSC，改变环境中细胞因子和趋化因子的表达程度。
　　4)吉西他滨联合抗PD-1抗体治疗肺肿瘤取得较好的疗效。
　　结论：
　　吉西他滨可有效清除荷瘤小鼠脾脏中MDSC，其与抗PD-1抗体联合治疗肺肿瘤具有协同效应。
　　第二部分：吉西他滨增强PD-1抗体抗肺癌疗效的临床病例分析
　　目的：
　　临床观察肺癌患者应用吉西他滨联合抗PD-1抗体治疗的疗效，分析疗效预测因子。
　　方法：
　　肺癌患者满足下列条件：病理类型为肺鳞癌或腺癌，一线使用吉西他滨联合顺铂/卡铂化疗，治疗进展后二线使用抗PD-1抗体治疗。另外采集10例健康自愿者外周血作为对照。应用流式细胞技术检测癌症患者和健康自愿者外周血中MDSC的数量，分析其与抗PD-1抗体疗效的关系。应用免疫组化技术分析肿瘤标本中CD3+T淋巴细胞浸润及PD-1和PD-L1的表达，应用全外显子测序(WES)技术进行肿瘤突变负荷(TMB)和插入/缺失突变(InDel)检测，分析这些指标与疗效的相关性。
　　结果：
　　1)满足上述条件接受抗PD-1抗体治疗的肺癌患者共有10例，其中男4例，女6例。疗效评价结果为：1例CR、4例PR、3例SD，2例PD，ORR为50%，DCR为80%。健康自愿者外周血中的MDSC水平在PBMC中所占的比例为0.3%，疗效为PR的患者外周血中的MDSC水平为1.3%，而疗效为PD的患者外周血中的MDSC水平为5.4%。表明，肺癌患者外周血中的MDSC水平越低，应用抗PD-1抗体治疗的疗效越好，MDSC是一种潜在的抗PD-1抗体疗效预测因子。
　　2)免疫组化检测结果显示，抗PD-1抗体疗效为PR与PD的肺癌患者肿瘤组织中均有CD3+T淋巴细胞的浸润，而且均无PD-1和PD-L1的表达。
　　3)通过WES检测分析的肺癌患者样本中TMB突变为2.43个/Mb，属于低的TMB突变负荷，且没有发生MMR相关基因的突变。肺癌患者的InDel突变的比例为0.037，与InDel突变比例中位值0.05相比无显著差别。
　　结论：
　　吉西他滨可增加PD-1抗体治疗肺癌的疗效。肺癌患者外周血中MDSC水平与抗PD-1抗体疗效相关，肿瘤组织中CD3+T细胞的浸润程度、PD-1和PD-L1的表达水平、TMB、MMR、InDel突变与抗PD-1抗体的疗效不支持具有相关性。因为观察病例数目较少，该结论尚需要大样本数量的临床研究证实。