论文部分内容阅读
多胺是机体中一种重要的阳离子脂肪族有机胺,在细胞增殖、分化中起重要的作用,细胞周期的维持也需要多胺的合成。鸟氨酸脱梭酶（ODC）和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶（AdoMetDC）是多胺生物合成的的关键酶。研究已证实,肺肿瘤中多胺水平明显增高,鸟氨酸脱羧酶（ODC）和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶（AdoMetDC）的表达也明显高于正常肺组织。我们在成功构建并扩增出ODC和AdoMetDC双反义RNA腺病毒载体的基础之上。研究鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对肺癌增殖和侵袭抑制作用目的探讨重组鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体（Ad-ODC-AdoMetDCas）介导的鸟氨酸脱羧酶（ODC）和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶（AdoMetDC）反义RNA对肺癌细胞多胺合成、增殖和侵袭的抑制作用。方法1.构建并扩增出ODC和SAMDC双反义RNA腺病毒载体;2.采用活细胞计数法实验观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖的影响;3.采用Western印迹和高效液相色谱分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量;4.采用活细胞计数和流式细胞仪分别检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA和Ad-ODC-AdoMetDCas对A-549细胞增殖和细胞周期分布的影响;5.应用Matrigel侵袭实验分析腺病毒对肺癌细胞侵袭活性的改变。结果1.成功构建并扩增出ODC和SAMDC双反义RNA腺病毒载体2.当感染效率为50时,腺病毒对A-549细胞感染率约75%;3.Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制A-549细胞ODC和AdoMetDC基因表达;A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,胞内多胺含量明显降低;4.感染Ad-ODC-AdoMetDCas的A-549细胞停滞在G1期;5.Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低A-549细胞的体外侵袭能力。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒能够显著抑制肺癌A-549细胞的增殖和侵袭。