骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,MSCs)是一种从骨髓中分离获得的成体干细胞。骨髓基质干细胞具有易于获取、分离方便、多向分化潜能和无免疫反应等特点,在细胞移植和基因治疗方面具有良好的应用前景。近年来,许多基础研究发现,骨髓基质干细胞可以在梗死的心肌组织中分化为心肌样细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞,形成血管结构。进一步研究认为,心肌微环境能诱导骨髓基质干细胞定向分化。同时,骨髓基质干细胞能合成和分泌大量的促细胞和血管生长因子。白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是心肌微环境中两种重要的细胞因子,在一定条件下心肌细胞和骨髓基质干细胞均能分泌IL-6和TNF-α。本课题在体外模拟心肌炎性微环境,研究不同浓度的IL-6和TNF-α对骨髓基质干细胞的趋化作用,及其对骨髓基质干细胞内分裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein Mnase,MAPK)/c-Jun N端激酶(JNK)转导通路和Janus激酶-信号转导子与转录激活子通路(JAK-STAT)中某些信号蛋白的影响。同时,在体外模拟心肌缺氧微环境,研究缺氧/复氧的心肌细胞所分泌的细胞因子在骨髓基质干细胞向心肌样细胞分化中的作用。通过对骨髓基质干细胞的迁移能力和定向分化等生物学特性的研究,为骨髓基质干细胞移植在心血管疾病中的应用积累实验基础。 第一部分 心肌微环境对骨髓基质干细胞趋化作用 及其对细胞内MAPK/JNK和JAK-STAT信号通路的影响 采用密度梯度离心法分离获取健康成人骨髓基质干细胞,以贴壁筛选法纯化骨髓基质干细胞。取传代后第三代细胞进行细胞形态学和流式细胞学鉴定,进入实验。