论文部分内容阅读
猪精子非常容易受到冷休克的伤害,并且对过氧化物损伤非常敏感,其原因是由于猪精子细胞膜上的磷脂质含有大量不饱和脂肪酸,并且精液自身存在相对较低的抗氧化能力的结果,本研究主要目的是评价猪精液在低温储存期间,在猪精液中添加不同浓度的鸽蛋LDL,冷冻解冻后采用SDS-PAGE、Western Blot、PCR扩增和DNA电泳等试验方法研究其对不同处理组猪精子活力的特性:平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、平均路径运动速度(VAP)、精子顶体完整性、热应激蛋白(HSP70)表达、抗凋亡基因(Bcl-21和Bcl-xl)以及促凋亡基因Bak表达的影响,得到以下结果:1、无论是冷休克还是快速冷冻解冻后,添加LDL组的精子活力特性:平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、平均路径运动速度(VAP)均高于未添加组,9%LDL冷休克组、9%LDL(-196℃)冻融精子组效果最好。2、用考马斯亮蓝染色法评价冷休克和冻融猪精子顶体完整性,结果显示:9%LDL冷休克组、9%LDL(-196℃)冻融精子组顶体完整性分别好于其他组。3、对不同处理组样本进行10%SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明热休克蛋白HSP70随温度的降低而表达量升高,添加9%LDL(-196℃)冷冻精子与鲜精样本最为相似。9%LDL(-196℃).9%LDL(-80℃).3%LDL(-196℃)组差异不显著。4、采用PCR扩增方法对抗凋亡基因Bcl-xl不同处理组样本进行分析,结果显示,鲜精处理组的基因表达量均高于其他处理组;3%LDL(-196℃)基因表达量高于除鲜精以外的其他三个处理组;而3%LDL(-80℃)处理组、9%LDL(-80℃)和9%LDL(-196℃)处理组基因表达量差异不显著。5、采用PCR扩增方法对促凋亡基因Bcl-21不同处理组样本进行分析,结果显示,鲜精处理组的基因表达量均高于其他处理组;3%LDL(-196℃)处理组基因表达量高于除鲜精以外的其他三个处理组;3%LDL(-80℃)基因表达量最低;3%LDL(-80℃).3%LDL(-196℃).9%LDL(-80℃).9%LDL(-196℃)基因表达量差异不显著。6、采用PCR扩增方法对抗凋亡基因Bak不同处理组样本进行分析,结果显示;鲜精处理组的基因表达量均低于其他处理组;3%LDL(-80℃)处理组基因表达量低于除鲜精以外的其他三个处理组;3%LDL(-196℃)基因表达量最高;鲜精组、3%LDL(-80℃)、9%LDL(-80℃)、9%LDL(-196℃)基因表达量差异不显著。总之,在猪精液冷冻保存过程中补充鸽蛋LDL浓度对解冻后精子的生存能力产生积极的影响。