论文部分内容阅读
B6杨是小黑杨雌株天然授粉而得,为雄株。B6杨继承了小黑杨适应性广泛、速生、抗寒、耐旱、抗病虫、树干通直圆满、材质洁白等优点,而且其生长速率比小黑杨提高20%以上。本实验研究了温度、光照、生长调节物质、低温处理、蔗糖浓度、培养容器对B6杨花药再生植株的影响;利用流式细胞仪(PA)对花药组培苗叶片进行倍性分析,同时对小黑杨SSR-PCR反应技术体系进行优化。主要实验结果如下:1.组织培养方面的研究表明:温度和光照对小黑杨花药愈伤诱导和不定芽诱导影响显著。暗培养有利于愈伤组织的诱导,光照有利于不定芽的分化;愈伤组织诱导和不定芽诱导最佳温度为25℃。愈伤组织诱导培养基为:1/2MS+2.0 mg·L-12,4-D+0.5 mg·L-1KT+30 g·L-1蔗糖,诱导率最高达到89.2%;诱导不定芽最佳培养基为:1/2MS+0.5mg·L-1 BA+0.05mg·L-1/NAA+20g·L-1蔗糖,不定芽诱导率最高达85.4%。生根培养基为:MH+0.2mg·L-1IBA+20g·L-1蔗糖,其诱导生根率达到100%。在其他条件相同的情况下不定芽的诱导率的趋势是玻璃培养瓶中明显高于塑料瓶的诱导率。2.流式细胞仪倍性分析表明:采用流式细胞仪对花药培养植株进行鉴定发现花培植株分别为单倍体,二倍体,四倍体,二、三、四混倍体植株,单倍体为2.3%,四倍体5.7%,混倍体3.4%,二倍体88.5%占绝大多数。3.小黑杨B6 SSR反应体系的优化结果:20μL反应体系:2.0μL 10×buffer (Mg2+free),1.0μL dNTP (2.5 Mm each),0.2μL Taq酶(2.5U/μL),2.0μL each引物。反应程序:94℃预变性3 min,循环一次;94℃变性30 s,50-58℃退火30 s,72℃延伸1 min,循环34次;最后72℃延伸5 min。对所选取得的5对引物进行筛选,筛选WPMS09这对引物带型清晰,重复性好,稳定性高。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳得出PCR产物的最佳上量为3μL。