榄香烯诱导人白血病细胞K562凋亡及p27~(Kip1)表达影响

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目的:榄香烯乳注射液(Elemene Emulsion Injection)在临床上主要用于肺癌等实体肿瘤的治疗。最近文献报道它还具有治疗血液系统肿瘤的作用,但其作用机理尚不清楚。本文拟研究榄香烯对人白血病细胞K562的凋亡诱导作用;研究细胞周期调节蛋白p27Kip1在凋亡中的变化;并初步探讨榄香烯引起p27Kip1表达变化的机制。方法:运用MTT法检测细胞生长抑制情况。光镜及电镜形态学观察、流式细胞仪等方法检测K562细胞凋亡及细胞周期分布的改变。免疫细胞法检测细胞内p27Kip1蛋白表达变化。RT-PCR技术检测p27Kip1 mRNA表达水平。结果:(1)12.5~100μg/ml榄香烯对K562细胞增殖有明显抑制作用,榄香烯与细胞抑制之间具有时间-剂量依赖性。(2)TEM观察发现,经50μg/ml处理48h的细胞出现了胞膜上微绒毛消失,染色质边集、核浓缩、核碎裂,见凋亡小体形成。(3) FCM结果表明,用榄香烯50、100μg/ ml作用48h后,细胞停滞于S期,细胞发生凋亡,DNA组方图上出现典型的凋亡峰,随浓度增加,凋亡百分率逐渐增高。(4)免疫细胞化学结果显示榄香烯可使人白血病细胞K562的p27Kip1蛋白表达上调。(5)RT-PCR结果表明榄香烯作用引起凋亡时细胞p27Kip1mRNA水平无变化。结论:榄香烯诱导K562细胞凋亡,与细胞周期蛋白p27Kip1表达密切有关。榄香烯影响p27Kip1蛋白表达,而不影响其mRNA转录水平。p27Kip1蛋白参与调节可能是发生在转录后。
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