【摘 要】
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采用大鼠胶质瘤细胞株(C6)和人胶质细胞瘤细胞株(U87MG和LN229),研究姜黄素(Curcumin)抑制胶质瘤细胞增殖和促进其凋亡的作用及分子机制。PTEN基因是近年来发现的、继P53之后
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采用大鼠胶质瘤细胞株(C6)和人胶质细胞瘤细胞株(U87MG和LN229),研究姜黄素(Curcumin)抑制胶质瘤细胞增殖和促进其凋亡的作用及分子机制。PTEN基因是近年来发现的、继P53之后又一重要的抑癌基因,其突变率在胶质细胞瘤中约占40%。Curcumin是否可以通过诱导野生型PTEN基因的表达而抑制脑胶质瘤细胞增殖和/或促进其凋亡,目前国内外尚无报道。方法:(1)MTT观察Curcumin对C6细胞存活增殖的影响,通过荧光标记的BrdU抗体,显微镜下观察Curcumin对C6细胞分裂增殖的影响。(2)碘化丙啶(propidium iodide,PI)经流式细胞仪测定Curcumin对C6细胞周期的阻滞。(3)用荧光染料Annexin V-PE和7-AAD借助于流式细胞仪观察Curcumin对C6细胞早期凋亡的影响;断裂DNA凝胶电泳检测Curcumin对C6细胞晚期凋亡的影响。(4)DCFDA荧光探针检测Curcumin诱导的细胞内活性氧的产生。(5) Realtime RT-PCR检测Curcumin对基因mRNA表达的影响及western blot检测Curcumin对蛋白表达的影响。(6) gel-shift分析系统检测Curcumin对核转录因子κB和AP-1活性的影响。(7)将携带野生型PTEN基因的腺病毒载体感染不表达野生型PTEN基因的人胶质瘤细胞株U87MG细胞后:观察其对细胞存活、分裂增殖及凋亡的影响。(8)用PTEN的单克隆抗体预处理表达野生型PTEN基因的人胶质瘤细胞
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