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肉鸡坏死性肠炎(Necrotic enteritis,NE)是家禽养殖业中普遍存在的一种肠毒型疾病,亚临床型NE造成的慢性肠道黏膜损伤会引起鸡群消化吸收功能减弱、日增重降低和饲料转化效率下降等生产性能损失的问题,严重时还会造成肉鸡成群死亡,死亡率最高可达50%。随着2020年7月1日的到来,我国畜牧业将逐步进入无抗养殖时代,但家禽坏死性肠炎发病率的上升再次成为畜牧工作者面前的一个难题。本试验通过构建肉鸡坏死性肠炎模型,探究在饲料中添加β-1,3-葡聚糖对肉鸡生长性能和肠道健康的影响,以期为β-1,3-葡聚糖作为一种新的抗生素替代物来防治家禽坏死性肠炎和在肉鸡无抗养殖中的应用提供重要的理论依据。本研究共包括三个部分:试验一饲粮中添加β-1,3-葡聚糖对感染产气荚膜梭菌肉鸡生长性能的影响试验一研究了在玉米-豆粕型基础饲粮中添加β-1,3-葡聚糖对感染产气荚膜梭菌肉鸡生长性能的影响。采用单因素完全随机试验设计,将672只公母各半的爱拔益加(AA)健康1日龄雏鸡随机分为7个处理:1)对照组:基础饲粮+不攻毒,2)攻毒组:基础饲粮+攻毒,3)CP125组:125 mg/kgβ-1,3-葡聚糖+攻毒,4)CP250组:250 mg/kgβ-1,3-葡聚糖+攻毒,5)CP375组:375 mg/kgβ-1,3-葡聚糖+攻毒,6)CP500组:500 mg/kgβ-1,3-葡聚糖+攻毒,7)CP750组:750 mg/kgβ-1,3-葡聚糖+攻毒。每个处理组6个重复,每个重复16只鸡,试验期42天。攻毒方法为:14～20日龄,每天对攻毒鸡群灌服1 m L浓度为1×10~8 CFU/m L的产气荚膜梭菌菌液,对照组鸡群灌服1 m L经过同样培养处理但不含产气荚膜梭菌的培养液(试验二和试验三中攻毒方法相同)。试验结果表明:1)试验前期(1～21日龄),饲粮中添加β-1,3-葡聚糖对肉鸡的平均日采食量、平均日增重及21日龄体重均没有显著影响(P>0.05);但对料肉比有显著影响的趋势(P=0.062),且当β-1,3-葡聚糖添加剂量在250～500 mg/kg时,效果相对较好,当剂量大于500 mg/kg时,料肉比可能会增大。在试验后期(22～42日龄),攻毒处理显著降低了肉鸡的42日龄体重、平均日增重和饲料转化效率(P<0.05);β-1,3-葡聚糖则能显著提高饲料转化效率和42日龄肉鸡体重(P<0.05)。2)攻毒处理使21日龄肝脏指数显著增大(P<0.05),而β-1,3-葡聚糖能够改善肝脏指数。3)产气荚膜梭菌攻毒显著上调了十二指肠和空肠肠道病理评分(P<0.05)。4)产气荚膜梭菌攻毒显著降低了21日龄十二指肠的VH/CD(P<0.05),当β-1,3-葡聚糖添加剂量在250～750 mg/kg时,与对照组之间不存在统计学差异,说明这个剂量区间β-1,3-葡聚糖效果较好;42日龄攻毒组的回肠隐窝深度显著大于其他各处理组(P<0.05)。综上,产气荚膜梭菌攻毒降低了肉鸡的生长性能,饲粮中添加250～500 mg/kgβ-1,3-葡聚糖可以改善肉鸡的生长性能。试验二饲粮中添加β-1,3-葡聚糖对感染产气荚膜梭菌肉鸡肠道健康的影响本试验研究了在玉米-豆粕型基础饲粮中添加β-1,3-葡聚糖(250 mg/kg)对感染产气荚膜梭菌肉鸡肠道健康的影响。采用2×2因子完全随机试验设计,将384只公母各半的爱拔益加(AA)健康1日龄雏鸡随机分为4个处理:1)对照组:基础饲粮+不攻毒,2)攻毒组:基础饲粮+攻毒,3)葡聚糖组:250 mg/kgβ-1,3-葡聚糖+不攻毒,4)葡聚糖+攻毒组:250 mg/kgβ-1,3-葡聚糖+攻毒。每个处理组6个重复,每个重复16只鸡,试验期42天。利用q PCR的方法检测肉鸡小肠黏膜中营养物质转运载体(Pep T1、SGLT1、L-FABP)、紧密连接蛋白(Claudin-1、Occludin、ZO-1)以及黏蛋白(MUC2)等基因m RNA的表达情况。试验结果表明:主效应分析显示,β-1,3-葡聚糖显著上调了21日龄回肠MUC2、42日龄十二指肠Pep T1和Occludin、空肠SGLT1和Claudin-1等m RNA的表达量(P<0.05);显著下调了21日龄十二指肠SGLT1和Occludin、空肠Occludin、回肠L-FABP和Occludin、42日龄回肠MUC2等m RNA的表达量(P<0.05)。产气荚膜梭菌攻毒显著提高了21日龄十二指肠MUC2的表达量(P<0.05);显著降低了21日龄空肠SGLT1、Occludin和Claudin-1、21日龄回肠Claudin-1和Occludin、42日龄空肠L-FABP等m RNA的表达量(P<0.05)。交互作用分析显示,两个处理因素对21日龄肉鸡小肠三个肠段MUC2和回肠Pep T1、42日龄空肠L-FABP等m RNA的表达量均存在交互作用(P<0.05)。综上,产气荚膜梭菌攻毒会影响肉鸡小肠对营养物质的吸收,并破坏小肠肠黏膜屏障功能。而饲粮中添加β-1,3-葡聚糖在一定程度上能改善攻毒造成的肠黏膜损伤,维持肠道健康。试验三饲粮中添加β-1,3-葡聚糖对感染产气荚膜梭菌肉鸡盲肠微生物区系的影响本试验分别于21和42日龄采集肉鸡盲肠内容物样品,针对16S r DNA V3～V4可变区进行16S高通量测序,检测肉鸡盲肠微生物菌群结构,探究β-1,3-葡聚糖和产气荚膜梭菌攻毒处理对肉鸡盲肠微生物群落的影响。试验结果显示:1)产气荚膜梭菌攻毒可以提高21日龄盲肠菌群的Chao1指数和ACE指数。2)攻毒处理会破坏菌群结构稳定性,而β-1,3-葡聚糖能够发挥较好的菌群调控作用,使攻毒造成的菌群紊乱结构与250 mg/kg葡聚糖处理组和对照组更加相似。3)21日龄时,各处理组共有的优势菌门有Firmicutes(厚壁菌门)、Tenericutes(柔膜菌门)、Proteobacteria(变形菌门)、Cyanobacteria(蓝藻菌门)、Actinobacteria(放线菌门)和Bacteroidetes(拟杆菌门)等;优势菌属有Faecalibacterium(粪杆菌属)、Unclassified＿Ruminococcaceae(瘤胃球菌科未分类属)、Unclassified＿Clostridiales(梭菌目未分类属)、Unclassified＿Lachnospiraceae(毛螺菌科未分类属)、Oscillospira(颤螺旋菌属)、[Ruminococcus]、Ruminococcus(瘤胃球菌属)、Blautia(布劳特氏菌属)、Dorea、Bacteroides(拟杆菌属)。42日龄时,各处理组共有的优势菌门有Firmicutes(厚壁菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门)、Proteobacteria(变形菌门)、Cyanobacteria(蓝藻菌门)和Actinobacteria(放线菌门)等;优势菌属有Faecalibacterium(粪杆菌属)、Unclassified＿Clostridiales(梭菌目未分类属)、Unclassified＿Ruminococcaceae(瘤胃球菌科未分类属)、Unclassified＿Rikenellaceae(理研菌科未分类属)、Unclassified＿Lachnospiraceae(毛螺菌科未分类属)、Oscillospira(颤螺旋菌属)、Alistipes(另枝菌属)、[Ruminococcus]、Bacteroides(拟杆菌属)、Parabacteroides(副拟杆菌属)。4)在门水平上,主效应分析显示,攻毒处理显著提高了42日龄Firmicutes(厚壁菌门)的相对丰度(P<0.05),显著降低了Bacteroidetes(拟杆菌门)的相对丰度(P<0.05)。在属水平上,主效应分析显示,攻毒处理显著提高了21日龄Faecalibacterium(粪杆菌属)的相对丰度(P<0.05),显著降低了21日龄Unclassified＿Ruminococcaceae和42日龄Oscillospira和Alistipes的相对丰度(P=0.001);交互作用分析显示,两个处理因素对21日龄Faecalibacterium、Unclassified＿Ruminococcaceae、Oscillospira、Blautia的相对丰度具有显著的交互作用(P<0.05)。综上,产气荚膜梭菌攻毒改变了肉鸡盲肠微生物菌群的组成和稳态,β-1,3-葡聚糖在一定程度上可以恢复这种改变,从而维持微生态平衡,进而改善肠道健康。综上所述,饲粮中添加β-1,3-葡聚糖可以改善感染产气荚膜梭菌肉鸡的生长性能和肠道健康,并可以调控肉鸡盲肠微生物区系的稳态。