一种优化的高通量RNA修饰定量检测分析平台的建立及应用

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在RNA中除了存在AUCG四种经典核苷酸之外,还存在多种多样的RNA修饰(例如m5C,m6A)。这些RNA修饰在多种类型的RNA中都存在例如tRNA,mRNA,rRNA以及其他非编码RNA。RNA修饰在多种细胞生命活动中都具有重要调控作用,例如RNA上的m6A修饰可以影响胚胎干细胞的自我更新,生物体的昼夜节律调节以及酵母的有丝分裂。除了m6A,目前已知的RNA修饰种类有100多种,而这些RNA修饰的具体功能还没有研究清楚。为了系统地分析研究RNA修饰,我们建立了一种基于液相色谱与质谱联用的高通量RNA修饰定量分析平台,可以同时对一个样本进行多达25种RNA修饰的定量分析检测。同时对定量方法进行了优化改进,将A、U、C、G经典核苷酸引入了定量体系,对于RNA修饰定量更加准确。我们应用该平台对Dnmt2敲除小鼠中精子tsRNAs修饰进行了定量分析检测,发现Dnmt2敲除小鼠精子tsRNAs上m5C和m2G修饰明显下降,提示m2G可能是一个新的DNMT2蛋白作用位点。
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