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目的:中期因子(Midkine,MK)是一种肝素结合生长因子,研究表明,血清MK水平与动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)相关性的缺血性心血管疾病的发生发展密切相关,但其作用及具体机制尚不明确。因此,本研究的目的是探讨MK对巨噬细胞胆固醇流出的影响及其可能机制。方法:RAW264.7巨噬细胞用含有50 mg/L氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)的无血清培养基孵育48h,使其荷脂,分别进行以下实验:1.不同浓度(0,50,100,200,400ng/ml)的MK处理16 h或200 ng/m L浓度的MK处理不同时间(0,6,12,24,48 h),采用油红O染色法及NBD-Cholesterol荧光标记法检测细胞内脂滴数量及胆固醇含量,液体闪烁计数(liquid scintillation counting,LSC)检测细胞胆固醇流出率及氧化酶法检测胞内脂质含量;细胞免疫荧光法、Western blot免疫印迹及实时定量PCR(Quantitative real time PCR,q RT-PCR)检测细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)的表达水平。2.过表达ABCA1后,观察MK对细胞脂质蓄积及胆固醇的流出的影响。3.干预AMPK-m TOR信号分子后,观察MK对细胞p-AMPK、p-m TOR、ABCA1表达及胆固醇流出、胞内脂质含量的影响。结果:1.与Control组比较,MK减少RAW264.7巨噬细胞胆固醇的流出率,促进胞内脂质蓄积,下调ABCA1的表达,并呈浓度-时间依赖性。2.与MK处理组比较,MK与ABCA1过表达共同处理组在一定程度上缓解了MK对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的抑制作用,使胞内脂质蓄积减少。3.MK抑制AMPK-m TOR信号分子的活性,且与Control及MK处理组比较,AICAR的处理使巨噬细胞ABCA1的表达及胆固醇流出增加,胞内脂质蓄积减少。此外,与MK处理组相比,AICAR与MK的共同处理削弱了MK对巨噬细胞ABCA1表达及胆固醇流出的抑制作用,从而使胞内脂质蓄积减少。结论:1.MK通过下调RAW264.7巨噬细胞ABCA1的表达,抑制胆固醇的流出,从而促使胞内脂质蓄积;2.AMPK-m TOR信号分子参与MK对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出过程的调控。