器官移植对许多终末期疾病的治疗是十分重要的手段,但器官移植导致的排斥反应是影响其成功率的主要原因。为了降低排斥反应的发生率,提高器官移植的成功率,目前需要病人终生使用免疫抑制剂。然而,长期使用免疫抑制剂除了会引起免疫抑制剂本身的毒副作用(诸如升高血压、肝肾毒性等不良反应)外,也可引起严重感染、恶性肿瘤的发生,从而影响器官移植的成功率和受者的长期存活率。若能造成移植宿主对移植抗原的免疫耐受状态或低免疫应答状态,同时保持对其它抗原免疫应答的反应能力是器官移植领域人们追求的理想目标。同种器官移植后,产生抗同种移植物的排斥反应,主要是因为受体免疫系统识别供体不相容的MHC抗原,引起免疫应答,触发了同种排斥反应的结果。其中同种反应性T细胞在排斥反应中发挥着重要作用,将其灭活后作为T细胞疫苗免疫,可诱导抗原特异性的免疫耐受或免疫低反应性。T细胞疫苗(T Cell Vaccine,TCV)是指用化学或物理方法灭活的致病性T细胞。其失去致病能力,但保持了活化致病性T细胞的免疫特征。研究证明,把引起自身免疫性疾病的自身反应性T细胞或导致同种移植排斥反应的同种反应性T细胞制备成TCV,免疫动物后能够诱导机体产生针对致病性T细胞的免疫应答。可以消除或减轻这些细胞的致病作用或反应能力,表现为对自身免疫性疾病的防治作用和诱导同种移植物质延长存活。糖尿病肾病是糖尿病中危害最严重、致死率最高的一种并发症,我国糖尿病病人中糖尿病肾病总发生率为47.7%。尤其以I型糖尿病病人为主。若I型糖尿病病程过20年,10%会有肾病,最终会发展为终末期肾病即尿毒症。胰肾联合移植(simultaneous pancreas-kidney transplantation,SPK)是临床治疗糖尿病肾病的唯一有效途径。1966年美国明尼苏达大学的Kelly和Lillehei成功实施了首例胰肾联合移植手术。根椐全美器官分配网络(UNOS)和国际胰腺移植登记中心(IPTR)记录,胰腺移植的总数正不断的增加,从1966年12月至2002年10月,总数达18843例,其中绝大多数在美国(13951例)。自1987年到2002年,UNOS报道的13330个胰腺移植病例中,其中78%采用SPK。迄今为止,SPK被公认为治疗I型糖尿病( IDDM)并发尿毒症的最理想的方法。20世纪80年代以来,随着移植技术的发展,以及新型免疫抑制剂的临床应用,使得该手术的安全性和成功率不断提高。本课题旨在研究T细胞疫苗是否能够诱导胰肾联合移植时的免疫耐受,为临床提高胰肾联合移植的成功率提供实验依据和理论参考。首先制备了T细胞疫苗并对其进行功能鉴定。实验选用近交系AS大鼠、SD大鼠和Wistar大鼠,利用AS大鼠和SD大鼠分离脾细胞后免疫Wistar大鼠,分离Wistar大鼠的脾细胞。在体外用ConA将其活化,使其表达多种活化受体,从而增强其抗原性,然后用丝裂霉素处理,灭活后制成T细胞疫苗。实验表明两种T细胞疫苗免疫Wistar大鼠后,都能够诱导脾细胞对ConA诱导的增殖能力低下,表明T细胞疫苗免疫后引起一定程度的T细胞非特异性免疫功能低下,部分解释了T细胞疫苗作用的抗原非特异性;T细胞疫苗能够诱导针对同种抗原发生免疫耐受,该效应既具有特异性,也有非特异性效应;T细胞疫苗能够诱导外周血T细胞发生凋亡,使CD4/CD8比值减小。建立稳定可靠的胰肾联合移植动物模型对于进行胰肾联合移植的生理及免疫方面的研究具有重要意义。大鼠由于基因型恒定,可利用纯系品种建立模型,证明模型稳定、可行,再用同种异体大鼠进行理论探索。因此大鼠是较理想的胰肾十二指肠联合移植的实验动物。我们在STZ诱导的糖尿病大鼠基础上建立了大鼠胰肾联合移植模型,术后生化指标、病理结果均正常。手术成功率为76%,为以后的免疫耐受试验奠定了基础。我们建立的大鼠胰肾联合移植模型采用了改进的血管吻合技术,大大减少了手术并发症,并缩短了手术时间。采用的胰液肠内引流术式更合乎生理,减少了并发症的发生。利用第一部分和第二部分的工作基础,制备同种抗原特异性T细胞疫苗,接种给胰肾联合移植受体大鼠,通过不同实验分组于不同时点进行免疫接种,以观察特异性免疫耐受的建立及排斥发生情况。我们用T细胞疫苗对同种异基因胰肾联合移植的排斥反应进行了治疗,实验中设立了免疫抑制剂FK506作为对照。研究结果表明,T细胞疫苗可部分抑制CD4和CD8细胞的比值增高,能够降低移植排斥反应时血清中白细胞介素-2和肿瘤坏死因子水平,并且能够在RNA水平和蛋白水平下调选择素的表达。根据现有的实验结果判断,我们认为T细胞疫苗对于胰肾联合移植的排斥反应具有一定的抑制效应,因而有一定的临床应用价值。综上所述,我们成功制作了T细胞疫苗,经验证明具有一定的诱导免疫耐受的作用,建立了稳定可靠的大鼠胰肾联合移植动物模型,并利用制作的T细胞疫苗观察了其对大鼠胰肾联合移植过程中免疫耐受的诱导,结果表明T细胞疫苗能够抑制排斥反应的发生,希望今后在临床胰肾联合移植的过程中发挥一定的作用,进一步提高移植成功率。