【摘 要】
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目的探究在子痫前期(preeclampsia, PE)发病中,胎盘microRNA (miR-155)表达增高抑制滋养细胞迁移及侵袭的机制。方法采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)及蛋白质印迹(Western blo
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目的探究在子痫前期(preeclampsia, PE)发病中,胎盘microRNA (miR-155)表达增高抑制滋养细胞迁移及侵袭的机制。方法采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)及蛋白质印迹(Western blot)技术调查重度PE患者胎盘及脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的大鼠PE模型胎盘中miR-155和CD81的表达情况。利用qRT-PCR和、Vestern blot检测人妊娠早期绒毛外滋养细胞株(HTR-8/SVneo细胞)中miR-155对细胞内源性CD81表达的调控及荧光素酶报告基因检测miR-155 对 CD81 3’UTR的调节作用。通过划痕试验及transwell侵袭实验,分别检测转染CD81表达质粒(pCS2-CD81)或CD81特异小干扰RNA (siCD81)后对滋养细胞迁移及侵袭功能的影响。运用细胞免疫荧光技术检测HTR-8/SVneo细胞中CD81对p27Kip1的胞质及胞核定位的影响。明胶酶谱实验检测HTR-8/SVneo细胞中CD81对MMP-2活性的调节。结果在重度PE患者胎盘及LPS诱导的大鼠PE模型的胎盘中,miR-155表达上调而CD81的表达下降。在HTR-8/SVneo细胞中,miR-155靶向作用CD813’UTR来抑制CD81表达。转染pCS2-CD81的HTR-8/SVneo细胞在24 h和36 h的细胞相对迁移率分别为35.66±2.85%和42.75±1.52%,而转染pCS2-EV的细胞在24h和36 h的细胞相对迁移率分别为29.50±2.65%和30.49 ±1.34%(P<0.05);转染siCD81的细胞,在24 h和36 h的细胞相对迁移率分别是转染对照干扰序列(siRNA control)细胞相对迁移率的62.79%和50.33%(P<0.05)。相比于转染pCS2-EV 的 HTR-8/SVneo细胞,转染pCS2-CD81的细胞侵袭过matrigel胶的细胞数目显著增多(P<0.05)；同时在转染pCS2-CD81的细胞中,MMP-2的mRNA相对表达量是对照组的1.57倍,MMP-2的活性也较对照组显著增强(P<0.05)。相反,在转染siCD81的细胞中,侵袭过natrigel胶的细胞数目显著减少,且MMP-2的表达及活性也较转染siRNA con trol的细胞明显下降(P<0.05)。相比于共转染pCS2-EV和pEGFP-miR-155的细胞,共转染pCS2-CD81和pEGFP-miR-155的细胞迁移及侵袭的能力增加。结论在重度PE患者胎盘和LPS诱导的大鼠PE模型胎盘中,1niR-155表达明显上调而CD81的表达下降。MiR-155靶向抑制滋养细胞中CD81的表达,从而抑制细胞的迁移及侵袭。过表达CD81补偿miR-155对滋养细胞迁移及侵袭的抑制作用。
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