目的:构建针对Notch-1基因的RNAi慢病毒表达载体,从转录后水平抑制Notch-1基因表达,为研究Notch-1信号通路提供技术工具;并利用构建的RNAi慢病毒感染神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,筛选出稳定转染细胞株,观察抑制Notch-1信号通路对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖的影响。方法:设计合成两对针对Notch-1 mRNA不同位点的shRNA编码序列,克隆到慢病毒穿梭质粒中,然后通过Gateway重组构建重组RNAi慢病毒表达载体;在293FT细胞中包装并进行病毒滴度测定,获得高滴度的病毒上清;慢病毒感染神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,RT-PCR和Western Blot检测构建的RNAi慢病毒对Notch-1表达的抑制效果;利用RNAi慢病毒抑制Notch-1表达,探讨Notch-1信号通路对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖的影响。结果:1、成功构建了针对Notch-1基因两个不同位点的RNAi慢病毒表达载体,经PCR和测序鉴定干扰片段的碱基序列及插入位点完全正确;2、在293FT细胞中包装,获得高滴度慢病毒上清;病毒液滴度在1.5×10~5TU -2.3×10~5TU之间,可满足后续实验需要;3、构建的两个RNAi慢病毒感染SH-SY5Y细胞后可使Notch-1mRNA表达量分别下降80%和66%;4、慢病毒感染SH-SY5Y后进行MTT检测,RNAi慢病毒组与无义干扰组和对照组相比,细胞增殖率明显下降(p<0.05或p<0.01)。结论:构建Notch-1特异的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制Notch-1基因的表达,可以作为研究Notch-1信号通路的重要技术手段;Notch-1信号通路被抑制后对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的增殖有重要影响。