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安徽、山东、江苏、浙江、福建等鸭、鹅养殖大省,自2010年4月以来,鸭、鹅发生了一种以产蛋量、采食量迅速减少,拉绿色稀粪且有脑炎样神经症状的传染病,感染率高达100%,发病率和死亡率在5%～30%之间,产蛋率一般从70%～90%下降至10%以内甚至完全停产。2011年9月,该病再次大面积爆发,临床症状与2010年相似,对我国家禽养殖业再次造成巨大的经济损失。鸭病毒性脑炎、鸭鹅脑炎-卵巢炎综合征或鸭传染性产蛋减少综合症等名称,在2011年中国畜牧兽医学会第一届水禽疫病防控研讨会上,将该病统一命名为鸭坦布苏病毒病。坦布苏病毒感染动物后可形成分泌型NS1蛋白,在出现临床症状之前,可检测到分泌到血清中的NS1蛋白。针对NS1蛋白的这一特性,本研究制备了抗坦布苏病毒NS1蛋白的单克隆抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测方法,用于坦布苏病毒感染的早期诊断,可减少因疾病大面积爆发而造成巨大的经济损失。本试验用鹅坦布苏病毒JS804株病毒免疫8周龄左右的BALB/c雌鼠,采用传统杂交瘤技术,用原核表达的纯化的NS1蛋白进行筛选,获得5株分泌特异性抗坦布苏病毒NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4D2、1B7、1C10、3G4和4A9。5株阳性杂交瘤细胞的培养上清及纯化腹水对鹅坦布苏病毒的ELISA效价分别为10、10、102、102、103和103、103、104、104、105。5株单抗对鹅坦布苏病毒JS804毒株均没有中和活性。间接免疫荧光试验和Western-blot试验结果表明5株单抗特异性高,均不与DHV、NDV、GPV、AIV和IBV发生交叉反应。4A9单抗的效价值最高,纯化效果也较好。本试验以鹅坦布苏JS804株病毒免疫兔制备的兔多抗为捕获抗体、单抗4A9为检测抗体,建立了检测鹅坦布苏病毒的双抗体夹心ELISA方法。该方法的最佳反应条件为：兔抗鹅坦布苏JS804株病毒的多抗最佳稀释度为1：1600,单抗的最适稀释度为1：160,抗原反应时间为1h,酶标二抗工作浓度为1：5000,作用时间1.5h,以OD450nm≥0.245作为阳性判定标准。该方法的板间、板内变异系数小于10%,病毒最低检出量为386.25 TCID50/0.1mL,与IBV、NDV、 AIV、DHV和GPV等无交叉反应。用该方法与RT-PCR方法同时检测22份临床样品,符合率为86.36%。表明建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点,可用于鹅坦布苏病毒感染的早期诊断。用建立的双夹心ELISA方法检测血清样品。25日龄的鸭子,通过肌肉注射鹅坦布苏病毒JS804株病毒,攻毒1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d后分别收集20只鸭的血清样品,用双抗体夹心ELISA方法和RT-PCR检测病毒,并对检测结果进行比较。试验结果表明：攻毒1d后两种方法检测均为阴性；攻毒2d后阳性率也很低；攻毒后3d、4d、5d、6d、7d、8d,双夹心ELISA方法检测阳性率为70%、75%、50%、85%、85%和100%,RT-PCR方法检测阳性率为30%、50%、30%、80%、70%、90%。说明双夹心ELISA方法在感染早期即可检测到病毒,比RT-PCR方法灵敏。两种方法的整体符合率为78.75%。