LPS诱导瓦灰鸽免疫器官的形态结构及其相关分子的表达研究

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脾脏、胸腺、腔上囊是家禽的重要免疫器官,对于机体抗病至关重要。鸽的沙门氏菌病属于家鸽养殖过程中的常见疾病,本试验通过应用沙门氏菌LPS(脂多糖)诱导瓦灰鸽建立炎症模型,研究对家鸽的免疫器官形态结构,炎症相关基因的表达变化,及其分子特性,以此进一步探索瓦灰鸽在沙门氏菌感染状态下的免疫调节机理。本试验选择50只28日龄的健康瓦灰鸽,将其分为试验组和对照组。试验组按100μg/kg体重连续腹腔注射沙门氏菌LPS,而对照组则注射同等剂量的生理盐水,分别于注射后的第1,3,5天采集瓦灰鸽的血液及其胸腺、脾脏、腔上囊,将这些免疫器官分成两份,其中一份放入4%多聚甲醛溶液固定24h,经过脱水、透明、浸蜡、包埋和切片等程序并制备成4um厚的切片,然后进行HE染色,评估两组瓦灰鸽的胸腺、脾脏、腔上囊的大体形态和组织结构变化;同时运用免疫组化及半定量光密度方法分析Akirin2、VIP阳性细胞的分布表达。另外一份放置于-80℃冰箱保存,经过提取各组织总RNA,运用荧光定量PCR方法,检测两组瓦灰鸽各免疫器官中Akirin2的表达水平变化;同时经过克隆测序获得Akirin2的部分m RNA序列,并运用生物信息学方法预测其编码蛋白的分子特性。本试验获得以下主要结果:1.成功克隆获得瓦灰鸽Akirin2基因的部分m RNA序列,序列长度为593bp,其基因编码区(CDS)序列全长为399bp,编码132个氨基酸。2.试验组瓦灰鸽的初期症状表现为体温升高,采食量下降,后期逐步恢复正常。3.试验组瓦灰鸽的部分血液常规指数发生变化。与对照组相比,在第1天,LYM、LYM%、PLT显著升高;在第3天,RDW、PLT显著升高;在第5天,LYM、PLT、PCT明显升高。4.试验组瓦灰鸽的免疫器官Akirin2表达水平发生改变。在注射后第1天,胸腺、脾脏、腔上囊的Akirin2表达水平出现下降,但在随后的第3天和第5天,Akirin2表达水平呈现趋向正常。5.试验组瓦灰鸽的免疫器官VIP表达水平发生改变。在注射后第1天,除脾脏表达升高,腔上囊和胸腺则呈现VIP表达水平下降;在注射后第3天,腔上囊、脾脏、胸腺的VIP表达水平下降;在注射后第5天,呈现和对照组几乎一致的表达水平。6.试验组瓦灰鸽的血清细胞因子浓度发生改变,IL-6、IL-4、IL-1β均表达上升,试验后期呈现回归正常趋势。本试验结果表明:当瓦灰鸽受到持续的LPS刺激时,在初期能迅速引发机体自身的免疫反应,在耐受程度内,免疫器官逐渐恢复正常的形态与结构,细胞因子及相关分子的表达和功能趋向增强和稳态。
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