【摘 要】
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冠状病毒(Coronavirus,Co V)可引发猪只急性腹泻、呼吸道等疾病,是导致新生仔猪死亡的主要原因之一,给全世界养猪业造成巨大的经济损失。2017年2月在中国广东发现了一种导致猪只腹泻的新型冠状病毒——猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus,SADS-Co V)。临床观察和动物实验均证实该病毒可导致新生仔猪的严重腹泻和死
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冠状病毒(Coronavirus,Co V)可引发猪只急性腹泻、呼吸道等疾病,是导致新生仔猪死亡的主要原因之一,给全世界养猪业造成巨大的经济损失。2017年2月在中国广东发现了一种导致猪只腹泻的新型冠状病毒——猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus,SADS-Co V)。临床观察和动物实验均证实该病毒可导致新生仔猪的严重腹泻和死亡。迄今为止,有关SADS-Co V感染机制和致病机理的研究非常有限,未见SADS-Co V感染状态下宿主细胞转录组学变化及猪血清淀粉样蛋白A(Serum Amyloid A 3,SAA3)对SADS-Co V复制影响的相关报道。本研究利用RNA-seq技术测定SADS-Co V感染猪肠上皮细胞IPEC-J2细胞系后基因转录水平的变化,并对与病毒感染有关的信号通路解析,对猪血清淀粉样蛋白A3抗SADS-Co V在细胞上复制的作用进行了研究。本研究主要结果如下:1.SADS-Co V感染状态下宿主细胞转录组学变化分析。利用RNA-seq技术对SADS-Co V感染后6、24、48h全转录组学进行了测序分析,结果表明SADS-Co V感染组和阴性对照组中共鉴定出24676个基因,其中已知基因23677个,新基因999个。显著性差异表达基因(Differentially Expression Genes,DEGs)共1897个,其中包括1260个上调DEGs和637个下调DEGs。GO富集分析表明,感染后6、24、48h的DEGs分别富集在79、383和233个GO条目上,主要涉及免疫系统过程、对刺激的响应、信号转导和细胞因子-细胞因子受体相互作用。一共有1897个DEGs被映射到四大类,共计109个KEGG Ontology(KO)通路上。注释到KEGG通路中的大多数DEGs与免疫系统,传染性病毒疾病和信号转导有关。结果还发现,在SADS-Co V感染后,宿主细胞的基因表达模式发生显著改变,激活了包括免疫应答,信号和细胞因子转导以及抗病毒应答等一系列特异性免疫应答程序。2.猪血清淀粉样蛋白A3抗SADS-Co V作用。猪血清淀粉样蛋白A3是一种急性期反应蛋白,基于转录组学数据在SADS-Co V感染过程中SAA3的m RNA呈显著上调趋势。通过对SAA3进行过表达和干扰减表达/沉默试验结果发现IPEC-J2细胞中过表达的SAA3可显著抑制SADS-Co V的复制,而被干扰减表达/沉默的SAA3可促进病毒的复制。
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