四环素降解菌的筛选降解性能优化及产物毒性研究

来源 :福州大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:pengwei000
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抗生素是一类具有抗病原体活性的物质,且能干扰其他活细胞的发育功能。抗生素种类纵多,均被广泛用于非病毒性感染的疾病治疗和水产畜牧养殖业的疾病预防中。由于近几十年来的滥用导致环境中常有抗生素残留的消息曝出,甚至于出现耐药性极强的病例患者。针对抗生素在环境中的残留现状及残留导致的危害情况,本文提出采用微生物降解法来解决问题。主要内容包括从当地某一制药厂抗生素药物生产车间周边土壤中分离筛选出对四环素有降解作用的菌株并进行驯化,对目标菌的降解性能进行研究与优化,以及对四环素降解前后的溶液进行细胞毒性的试验研究。第二章节中通过选择培养基进行目标菌筛选,并通过不断提高培养基中的四环素浓度进行驯化,最终筛选出三株降解率较高的目标菌TCD1、TCD2和TCD3,初始降解率分别为20.50%、26.32%和24.97%。遗传学鉴定结果表明TCD1和TCD2在分类学上均属于克雷白氏杆菌属(Klebsiella),命名为Klebsiella sp.TCDl 和 Klebsiella sp.TCD2,而 TCD3 则属于沙雷氏菌属(Serratia),命名为 Serratiasp.TCD3。第三章节主要对菌的降解性能进行优化,包括培养条件的优化和降解条件的优化,优化结果表明对TCD1、TCD2和TCD3来说培养基中最优C源分别是无碳源、1%的葡萄糖和无碳源;最优N源均是0.5%的尿素;促进三种目标菌降解作用较为明显的微量元素有Cu2+和Fe2+。降解条件优化后,对TCD1、TCD2和TCD3而言最优的时间确定为5d;最优的温度分别是30℃、30℃和35℃;最优初始pH分别是5、8和5;降解效果最优的摇床转速分别是150rpm、150rpm和130rpm;最优接种量均确定为1%;底物浓度则是随浓度升高,毒性增大,降解效果也就越差,本文选择底物浓度100mg/L。优化之后,TCD1、TCD2和TCD3的降解率分别从初始的20.50%、26.32%和24.97%提高到优化后的84.63%、90.49%和83.71%。第四章节进行四环素的细胞毒性试验。通过MTT法发现当四环素浓度达到300mg/L时,细胞存活率仅47.46%,且毒性与四环素浓度正相关关系;而流式细胞仪又进一步的通过细胞凋亡和细胞周期试验证明四环素对HSF细胞毒性作用与四环素浓度的正相关性。降解后,通过MTT法进行对比发现TCD1、TCD2和TCD3降解后,细胞存活率从49.48%分别提高到了 68.36%、69.18%和77.71%,进一步证实了该课题的可行性与安全性。
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