【摘 要】
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骨桥蛋白(osteopontin, OPN),是一种在多种组织和细胞广泛表达的磷酸化糖蛋白。OPN具有多种生物学功能,特别是OPN与自身免疫,肿瘤的生长和转移有密切的关系。目的：制备人骨桥
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骨桥蛋白(osteopontin, OPN),是一种在多种组织和细胞广泛表达的磷酸化糖蛋白。OPN具有多种生物学功能,特别是OPN与自身免疫,肿瘤的生长和转移有密切的关系。目的：制备人骨桥蛋白(osteopontin, OPN)特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其生物学功能.方法：利用RT-PCR技术克隆人骨桥蛋白(hOPN)基因.构建OPN原核表达质粒,转化BL21菌株,IPTG诱导表达rhOPN.利用纯化的rhOPN蛋白为免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合,通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得抗人OPN蛋白mAb杂交瘤细胞株,以ELISA、Western blot对抗体特异性进行鉴定.通过竞争抑制试验对单克隆抗体识别抗原位点进行分析.通过细胞侵袭试验检测抗人OPN单克隆抗体的功能.结果：获得2株抗人OPN单克隆抗体,分别命名为8F1和285,亚型测定皆为IgG1,且这2株抗体皆能很好地抑制细胞迁移.结论：本研究成功获得了2株抗人骨桥蛋白的特异性单克隆抗体,且这2株抗体皆能很好地抑制细胞迁移。为进一步研究OPN蛋白在自身免疫病和肿瘤中的功能提供了重要的工具.
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