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目的:
抑郁症是一类以情绪或心境低落为主要表现的疾病的总称。抑郁症常伴有躯体症状,其消化系统症状包括食欲减退、体重减轻、腹胀、便秘、恶心、嗳气、腹泻等。前期研究发现,抑郁症表现出的精神心理症状及消化系统症状与中医肝郁犯胃证的临床表现上高度相似。本研究基于CiteSpace网络可视化分析抑郁与胃排空、摄食的关系,并深入分析影响胃排空及摄食的相关信号变化,以此为中医肝郁犯胃提供现代文献的研究基础,进而从抑郁模型大鼠摄食信号来研究“肝郁犯胃”的机制及疏肝和胃汤的作用,为肝郁犯胃的研究提供理论基础及实验依据。
方法:
1.理论研究:收集Web of science、美国国立医学图书馆、科学在线图书馆数据库中近年来抑郁症的实验研究文献及摄食、胃排空的实验研究文献;运用CiteSpace软件对其关键词进行分析;并结合中医理论,探讨中医肝郁犯胃研究的切入点。
2.实验研究:①将85只SD大鼠适应性喂养7天,随即于造模前进行一次行为学测试及体重测量,筛选出行为学表现及体重相近的78只大鼠,按照随机原则分为6组,每组13只,分别为:空白组(3周)、模型组(3周)、空白组(4周)、模型组(4周)、空白组(5周)、模型组(5 周),分别造模 3、4、5 周,造模完成后,给予生理盐水灌胃,而后评价行为学并测定甲基橙胃残留率。②将115只SD大鼠适应性喂养7天,随机分为空白组19只,造模组96只,空白组自主摄食,每笼4只,其余各组动物均单笼喂养并造模。大鼠造模5周后,进行行为学检测,筛选出行为学表现及体重相近的85只大鼠,随机分为模型组18只、疏肝和胃汤低剂量组16只、中剂量组16只、高剂量组18只、氟西汀组17只。然后给予相应药物干预1周,每日给药2次。疏肝和胃汤以蒸馏法提取挥发油及芳香水,以水煮醇沉法提取浸膏,将提取物共同研磨,配制成低、中、高浓度药液(每毫升生药量分别为0.56g,1.12g,2.24g),氟西汀用生理盐水配置成0.21mg/ml的混悬液。药物用量根据成人临床等效剂量折算(体表面积计算法)空白组、模型组给予生理盐水;疏肝和胃汤低、中、高剂量组分别按3.67g/kg·d、7.34g/kg·d、14.68g/kg·d 给药;氟西汀组按 1.58mg/kg·d给药。灌胃完成后,运用糖水消耗、旷场实验、强迫游泳实验进行行为学评价。
②下丘脑、血清、胃组织相关指标检测:采用Elisa法检测抑郁模型大鼠下丘脑、血清、胃组织中 NPY、Leptin、Gherlin、Orexin、CCK 的含量;采用 RT-PCR 法检测抑郁模型大鼠下丘脑、胃组织中Gherlin、GHS-R、Prepro-Orexin、OX1-R、CCK、CCK-AR及下丘脑中Y1受体、OB-R mRNA的相对表达量;采用免疫荧光法检测抑郁模型大鼠下丘脑、胃组织GHS-R、OX1-R、CCK-AR及下丘脑Y1受体、OB-R的表达。
结果:
1. 纳入 3666 篇抑郁症研究文献及 4194 篇胃排空、摄食研究文献。提取抑郁症研究文献关键词前200个,胃排空、摄食研究文献关键词前100个,其中含相同关键26个。如图1、表1所示,抑郁症研究领域与摄食及胃排空研究领域共同的关键词中涉及症状或表现有抑郁症、焦虑、摄食、肥胖、自发活动;涉及机制有应激、HPA轴、炎性反应、氧化应激、奖赏、胰岛素抵抗;涉及脑区有下丘脑、海马、腹侧被盖区、前额叶皮层、伏隔核;涉及活性分子有促肾上腺激素释放激素、血清素、神经肽Y、多巴胺。
2.实验研究:
实验一:抑郁模型大鼠行为学、胃排空的动态变化
①糖水消耗实验:与空白组(3、4、5周)比较,模型组(3、4、5周)糖水偏好率明显下降(P<0.05或P<0.01);模型组(3、4、5周)之间差异无统计学意义(P>0.05)。
②旷场试验:模型组(3周)与空白组(3周)之间运动距离的差异无统计学意义(P>0.05),与空白组(4、5周)比较,模型组(4、5 周)运动距离明显缩短(P<0.05);与空白组(3、4、5 周)相比较,模型组(3、4、5周)静止时间明显延长(P<0.05);与空白组(3、4、5周)相比较,模型组(3、4、5周)穿越中央区域次数减少(P<0.05);与模型组(3周)比较,模型组(4、5周)运动距离下降,静止时间延长(P<0.05),穿越中央区域次数差异无统计学意义(P>0.05)。
③强迫游泳实验:与空白组(3、4、5周)比较,模型组(3、4、5 周)不动时间明显延长(P<0.05);模型组(3、4、5 周)之间差异无统计学意义(P>0.05)。
④新奇摄食抑制实验:与空白组(3、4、5周)比较,模型组(3周)5min内进食成功大鼠显著减少(P<0.01);模型组(3、4、5周)之间差异无统计学意义(P>0.05)。
⑤与空白组(3、4周)比较,模型组(3、4周)差异无统计学意义(P>0.05);与空白组(5 周)比较,模型组(5 周)甲基橙残留率显著上升(P<0.05)。
实验二:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠行为学的影响
①糖水消耗实验:与空白组比较,模型组糖水偏好率明显下降(P<0.05);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组,氟西汀组糖水偏好率升高(P<0.05,或 P<0.01);与氟西汀组比较,疏肝和胃汤各剂量组差异均无统计学意义(P>0.05)。
②旷场试验:与空白组比较,模型组旷场实验运动总距离明显缩短,静止时间明显延长,穿越中央区域次数减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组,氟西汀组运动总距离延长,静止时间明显缩短,穿越中央区域次数增多(P<0.01 或 P<0.05);与氟西汀组比较,疏肝和胃汤各剂量组差异均无统计学意义(P>0.05)。
③强迫游泳实验:与空白组比较,模型组不动时间明显延长(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组,氟西汀组不动时间明显缩短(P<0.05);与氟西汀组比较,疏肝和胃汤各剂量组差异均无统计学意义(P>0.05)。
实验三:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠血清NPY水平及下丘脑室旁核Y1受体表达的影响
①与空白组比较,模型组血清 NPY 含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组血清NPY含量显著升高(P<0.05);各组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)
②与空白组比较,模型组下丘脑NPY1R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤高剂量组、氟西汀组下丘脑NPY1R mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);各组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑室旁核Y1受体阳性表达区域面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑室旁核Y1受体表达区域面积显著增加(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组阳性面积均大于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组下丘脑室旁核Y1受体阳性区域占总面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组Y1受体阳性区域占比增加(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
实验四:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠血清Leptin水平及下丘脑弓状核OB-R表达的影响
①与空白组比较,模型组血清 Leptin含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤高剂量组血清Leptin含量显著下降(P<0.05);各剂量中药组均高于氟西汀组(P<0.01)。
②模型组下丘脑OB-R mRNA相对表达量与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,疏肝和胃汤低剂量组下丘脑OB-R mRNA相对表达量降低(P<0.05);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑弓状核OB-R阳性表达区域面积与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,疏肝和胃汤低、高剂量组下丘脑弓状核OB-R阳性表达区域面积显著增加(P<0.01);其中疏肝和胃汤低剂量组阳性面积大于氟西汀组(P<0.05)。
模型组下丘脑弓状核OB-R阳性区域占总面积与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,疏肝和胃汤各剂量组OB-R 阳性区域占比与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
实验五:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠下丘脑、血清、胃组织Ghrelin水平及下丘脑弓状核、胃组织中GHS-R表达的影响
①与空白组比较,模型组血清Ghrelin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组血清Ghrelin含量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组下丘脑Ghrelin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑Ghrelin含量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤中剂量组高于氟西汀组(P<0.01),疏肝和胃汤高剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
与空白组比较,模型组胃组织Ghrelin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织Ghrelin含量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤高剂量组高于氟西汀组(P<0.01),疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
②与空白组比较,模型组下丘脑Ghrelin mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑Ghrelin mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织Ghrelin mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织Ghrelin mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤高剂量组高于氟西汀组(P<0.01),疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑GHS-R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑GHS-R mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织GHS-R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织GHS-R mRNA 相对表达量显著升高(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
④与空白组比较,模型组下丘脑弓状核GHS-R阳性表达区域面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑弓状核 GHS-R 阳性表达区域面积显著增加(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组阳性面积大于氟西汀组(P<0.01,P<0.05)。
与空白组比较,模型组模型组下丘脑弓状核GHS-R阳性区域占总面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组GHS-R阳性区域占比增加(P<0.05);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
⑤与空白组比较,模型组胃组织中GHS-R平均荧光密度下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织中GHS-R平均荧光密度上升(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤中、高剂量组荧光密度大于氟西汀组(P<0.05)。
实验六:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠血清、胃组织、下丘脑 Orexin水平及下丘脑室旁核、胃组织OX1-R表达的影响
①与空白组比较,模型组血清Orexin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤高剂量组血清Orexin含量显著升高(P<0.01);各中药组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
与空白组比较,模型组下丘脑Orexin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑 Orexin 含量显著升高(P<0.01或P<0.05);各中药组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
与空白组比较,模型组胃组织Orexin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织 Orexin 含量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤低、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01),疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
②与空白组比较,模型组下丘脑Prepro-Orexin mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑Prepro-Orexin mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织Prepro-Orexin mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、高剂量组胃组织Prepro-Orexin mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤低、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑OX1-R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑OX1-R mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织OX1-R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织OX1-R mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);疏肝和胃汤高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
④与空白组比较,模型组下丘脑室旁核OX1-R阳性表达区域面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑室旁核OX1-R阳性表达区域面积显著增加(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤中、高剂量组阳性面积大于氟西汀组(P<0.01,P<0.05)。
与空白组比较,模型组下丘脑室旁核OX1-R阳性区域占总面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组 OX1-R阳性区域占比增加(P<0.05);疏肝和胃汤中、高剂量组阳性区域占比大于氟西汀组(P<0.05)。
⑤与空白组比较,模型组胃组织中OX1-R平均荧光密度下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织中OX1-R平均荧光密度上升(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤高剂量组荧光密度大于氟西汀组(P<0.05)。
实验七:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠血清、下丘脑、胃组织CCK及下丘脑室旁核、胃组织CCK-AR表达的影响
①与空白组比较,模型组血清 CCK含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组血清CCK含量显著下降(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组低于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
与空白组比较,模型组下丘脑 CCK含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑CCK含量显著下降(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组低于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
与空白组比较,模型组胃组织 CCK含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织CCK含量显著下降(P<0.01或P<0.05);各剂量中药组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
②与空白组比较,模型组下丘脑CCK mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑CCK mRNA 相对表达量显著下降(P<0.01);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组表达量低于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑CCK-AR mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑CCK-AR mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组表达量低于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织CCK-AR mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织CCK-AR mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组表达量低于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
④与空白组比较,模型组下丘脑室旁核 CCK-AR 阳性表达区域面积增加(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑室旁核CCK-AR阳性表达区域面积显著减少(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组阳性面积均小于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组下丘脑室旁核 CCK-AR 阳性区域占总面积比例升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组CCK-AR阳性区域占比下降(P<0.05);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
⑤与空白组比较,模型组胃组织中 CCK-AR 平均荧光密度升高( P<0.01 );与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织中CCK-AR平均荧光密度下降(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤高剂量组荧光密度小于氟西汀组(P<0.01)。
结论:
(1)Citespace分析的抑郁症与胃排空、摄食之间的相关性和中医肝郁犯胃的具有高度相似性。抑郁症与胃排空及摄食的关联机制可能是应激刺激下丘脑分泌 CRF,通过神经-内分泌机制或奖赏环路抑制摄食及胃排空。NPY、Leptin、Ghrelin、Orexin、CCK参与应激导致的胃排空延迟及摄食行为改变。
(2)抑郁模型大鼠摄食冲动下降及胃排空延迟可能与下丘脑、胃组织Ghrelin、Orexin水平下降、CCK水平上升;血清NPY、Ghrelin、Orexin 含量下降,Leptin、CCK 含量上升;下丘脑室旁核 Y1 受体、OX1-R表达下降,CCK-AR表达上升;下丘脑弓状核GHS-R表达下降;胃组织中GHS-R、OX1-R表达下降,CCK-AR表达上升有关。(3)疏肝和胃汤可通过升高抑郁模型血清NPY、Ghrelin、Orexin水平,降低CCK、Leptin水平;升高下丘脑及胃组织中Ghrelin、Orexin水平及其mRNA表达,降低CCK水平及其mRNA表达;升高弓状核中GHS-R及其mRNA表达;升高室旁核中Y1受体、OX1-R及其mRNA表达,降低CCK-AR及其mRNA的表达。
(4)中医“肝郁犯胃证”的机制可能与应激导致血清、下丘脑、胃组织中NPY、Leptin、Ghrelin、Orexin、CCK水平的变化及其下丘脑、胃组织中相应受体表达的异常改变有关。
抑郁症是一类以情绪或心境低落为主要表现的疾病的总称。抑郁症常伴有躯体症状,其消化系统症状包括食欲减退、体重减轻、腹胀、便秘、恶心、嗳气、腹泻等。前期研究发现,抑郁症表现出的精神心理症状及消化系统症状与中医肝郁犯胃证的临床表现上高度相似。本研究基于CiteSpace网络可视化分析抑郁与胃排空、摄食的关系,并深入分析影响胃排空及摄食的相关信号变化,以此为中医肝郁犯胃提供现代文献的研究基础,进而从抑郁模型大鼠摄食信号来研究“肝郁犯胃”的机制及疏肝和胃汤的作用,为肝郁犯胃的研究提供理论基础及实验依据。
方法:
1.理论研究:收集Web of science、美国国立医学图书馆、科学在线图书馆数据库中近年来抑郁症的实验研究文献及摄食、胃排空的实验研究文献;运用CiteSpace软件对其关键词进行分析;并结合中医理论,探讨中医肝郁犯胃研究的切入点。
2.实验研究:①将85只SD大鼠适应性喂养7天,随即于造模前进行一次行为学测试及体重测量,筛选出行为学表现及体重相近的78只大鼠,按照随机原则分为6组,每组13只,分别为:空白组(3周)、模型组(3周)、空白组(4周)、模型组(4周)、空白组(5周)、模型组(5 周),分别造模 3、4、5 周,造模完成后,给予生理盐水灌胃,而后评价行为学并测定甲基橙胃残留率。②将115只SD大鼠适应性喂养7天,随机分为空白组19只,造模组96只,空白组自主摄食,每笼4只,其余各组动物均单笼喂养并造模。大鼠造模5周后,进行行为学检测,筛选出行为学表现及体重相近的85只大鼠,随机分为模型组18只、疏肝和胃汤低剂量组16只、中剂量组16只、高剂量组18只、氟西汀组17只。然后给予相应药物干预1周,每日给药2次。疏肝和胃汤以蒸馏法提取挥发油及芳香水,以水煮醇沉法提取浸膏,将提取物共同研磨,配制成低、中、高浓度药液(每毫升生药量分别为0.56g,1.12g,2.24g),氟西汀用生理盐水配置成0.21mg/ml的混悬液。药物用量根据成人临床等效剂量折算(体表面积计算法)空白组、模型组给予生理盐水;疏肝和胃汤低、中、高剂量组分别按3.67g/kg·d、7.34g/kg·d、14.68g/kg·d 给药;氟西汀组按 1.58mg/kg·d给药。灌胃完成后,运用糖水消耗、旷场实验、强迫游泳实验进行行为学评价。
②下丘脑、血清、胃组织相关指标检测:采用Elisa法检测抑郁模型大鼠下丘脑、血清、胃组织中 NPY、Leptin、Gherlin、Orexin、CCK 的含量;采用 RT-PCR 法检测抑郁模型大鼠下丘脑、胃组织中Gherlin、GHS-R、Prepro-Orexin、OX1-R、CCK、CCK-AR及下丘脑中Y1受体、OB-R mRNA的相对表达量;采用免疫荧光法检测抑郁模型大鼠下丘脑、胃组织GHS-R、OX1-R、CCK-AR及下丘脑Y1受体、OB-R的表达。
结果:
1. 纳入 3666 篇抑郁症研究文献及 4194 篇胃排空、摄食研究文献。提取抑郁症研究文献关键词前200个,胃排空、摄食研究文献关键词前100个,其中含相同关键26个。如图1、表1所示,抑郁症研究领域与摄食及胃排空研究领域共同的关键词中涉及症状或表现有抑郁症、焦虑、摄食、肥胖、自发活动;涉及机制有应激、HPA轴、炎性反应、氧化应激、奖赏、胰岛素抵抗;涉及脑区有下丘脑、海马、腹侧被盖区、前额叶皮层、伏隔核;涉及活性分子有促肾上腺激素释放激素、血清素、神经肽Y、多巴胺。
2.实验研究:
实验一:抑郁模型大鼠行为学、胃排空的动态变化
①糖水消耗实验:与空白组(3、4、5周)比较,模型组(3、4、5周)糖水偏好率明显下降(P<0.05或P<0.01);模型组(3、4、5周)之间差异无统计学意义(P>0.05)。
②旷场试验:模型组(3周)与空白组(3周)之间运动距离的差异无统计学意义(P>0.05),与空白组(4、5周)比较,模型组(4、5 周)运动距离明显缩短(P<0.05);与空白组(3、4、5 周)相比较,模型组(3、4、5周)静止时间明显延长(P<0.05);与空白组(3、4、5周)相比较,模型组(3、4、5周)穿越中央区域次数减少(P<0.05);与模型组(3周)比较,模型组(4、5周)运动距离下降,静止时间延长(P<0.05),穿越中央区域次数差异无统计学意义(P>0.05)。
③强迫游泳实验:与空白组(3、4、5周)比较,模型组(3、4、5 周)不动时间明显延长(P<0.05);模型组(3、4、5 周)之间差异无统计学意义(P>0.05)。
④新奇摄食抑制实验:与空白组(3、4、5周)比较,模型组(3周)5min内进食成功大鼠显著减少(P<0.01);模型组(3、4、5周)之间差异无统计学意义(P>0.05)。
⑤与空白组(3、4周)比较,模型组(3、4周)差异无统计学意义(P>0.05);与空白组(5 周)比较,模型组(5 周)甲基橙残留率显著上升(P<0.05)。
实验二:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠行为学的影响
①糖水消耗实验:与空白组比较,模型组糖水偏好率明显下降(P<0.05);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组,氟西汀组糖水偏好率升高(P<0.05,或 P<0.01);与氟西汀组比较,疏肝和胃汤各剂量组差异均无统计学意义(P>0.05)。
②旷场试验:与空白组比较,模型组旷场实验运动总距离明显缩短,静止时间明显延长,穿越中央区域次数减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组,氟西汀组运动总距离延长,静止时间明显缩短,穿越中央区域次数增多(P<0.01 或 P<0.05);与氟西汀组比较,疏肝和胃汤各剂量组差异均无统计学意义(P>0.05)。
③强迫游泳实验:与空白组比较,模型组不动时间明显延长(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组,氟西汀组不动时间明显缩短(P<0.05);与氟西汀组比较,疏肝和胃汤各剂量组差异均无统计学意义(P>0.05)。
实验三:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠血清NPY水平及下丘脑室旁核Y1受体表达的影响
①与空白组比较,模型组血清 NPY 含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组血清NPY含量显著升高(P<0.05);各组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)
②与空白组比较,模型组下丘脑NPY1R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤高剂量组、氟西汀组下丘脑NPY1R mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);各组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑室旁核Y1受体阳性表达区域面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑室旁核Y1受体表达区域面积显著增加(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组阳性面积均大于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组下丘脑室旁核Y1受体阳性区域占总面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组Y1受体阳性区域占比增加(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
实验四:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠血清Leptin水平及下丘脑弓状核OB-R表达的影响
①与空白组比较,模型组血清 Leptin含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤高剂量组血清Leptin含量显著下降(P<0.05);各剂量中药组均高于氟西汀组(P<0.01)。
②模型组下丘脑OB-R mRNA相对表达量与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,疏肝和胃汤低剂量组下丘脑OB-R mRNA相对表达量降低(P<0.05);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑弓状核OB-R阳性表达区域面积与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,疏肝和胃汤低、高剂量组下丘脑弓状核OB-R阳性表达区域面积显著增加(P<0.01);其中疏肝和胃汤低剂量组阳性面积大于氟西汀组(P<0.05)。
模型组下丘脑弓状核OB-R阳性区域占总面积与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,疏肝和胃汤各剂量组OB-R 阳性区域占比与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
实验五:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠下丘脑、血清、胃组织Ghrelin水平及下丘脑弓状核、胃组织中GHS-R表达的影响
①与空白组比较,模型组血清Ghrelin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组血清Ghrelin含量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组下丘脑Ghrelin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑Ghrelin含量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤中剂量组高于氟西汀组(P<0.01),疏肝和胃汤高剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
与空白组比较,模型组胃组织Ghrelin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织Ghrelin含量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤高剂量组高于氟西汀组(P<0.01),疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
②与空白组比较,模型组下丘脑Ghrelin mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑Ghrelin mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织Ghrelin mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织Ghrelin mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤高剂量组高于氟西汀组(P<0.01),疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑GHS-R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑GHS-R mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织GHS-R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织GHS-R mRNA 相对表达量显著升高(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
④与空白组比较,模型组下丘脑弓状核GHS-R阳性表达区域面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑弓状核 GHS-R 阳性表达区域面积显著增加(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组阳性面积大于氟西汀组(P<0.01,P<0.05)。
与空白组比较,模型组模型组下丘脑弓状核GHS-R阳性区域占总面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组GHS-R阳性区域占比增加(P<0.05);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
⑤与空白组比较,模型组胃组织中GHS-R平均荧光密度下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织中GHS-R平均荧光密度上升(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤中、高剂量组荧光密度大于氟西汀组(P<0.05)。
实验六:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠血清、胃组织、下丘脑 Orexin水平及下丘脑室旁核、胃组织OX1-R表达的影响
①与空白组比较,模型组血清Orexin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤高剂量组血清Orexin含量显著升高(P<0.01);各中药组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
与空白组比较,模型组下丘脑Orexin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑 Orexin 含量显著升高(P<0.01或P<0.05);各中药组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
与空白组比较,模型组胃组织Orexin含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织 Orexin 含量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤低、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01),疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
②与空白组比较,模型组下丘脑Prepro-Orexin mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑Prepro-Orexin mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织Prepro-Orexin mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、高剂量组胃组织Prepro-Orexin mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤低、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑OX1-R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑OX1-R mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织OX1-R mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织OX1-R mRNA相对表达量显著升高(P<0.01或P<0.05);疏肝和胃汤高剂量组高于氟西汀组(P<0.01)。
④与空白组比较,模型组下丘脑室旁核OX1-R阳性表达区域面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑室旁核OX1-R阳性表达区域面积显著增加(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤中、高剂量组阳性面积大于氟西汀组(P<0.01,P<0.05)。
与空白组比较,模型组下丘脑室旁核OX1-R阳性区域占总面积减少(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组 OX1-R阳性区域占比增加(P<0.05);疏肝和胃汤中、高剂量组阳性区域占比大于氟西汀组(P<0.05)。
⑤与空白组比较,模型组胃组织中OX1-R平均荧光密度下降(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织中OX1-R平均荧光密度上升(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤高剂量组荧光密度大于氟西汀组(P<0.05)。
实验七:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠血清、下丘脑、胃组织CCK及下丘脑室旁核、胃组织CCK-AR表达的影响
①与空白组比较,模型组血清 CCK含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组血清CCK含量显著下降(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组低于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
与空白组比较,模型组下丘脑 CCK含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组下丘脑CCK含量显著下降(P<0.01);其中疏肝和胃汤中、高剂量组低于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
与空白组比较,模型组胃组织 CCK含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组胃组织CCK含量显著下降(P<0.01或P<0.05);各剂量中药组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
②与空白组比较,模型组下丘脑CCK mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑CCK mRNA 相对表达量显著下降(P<0.01);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组表达量低于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
③与空白组比较,模型组下丘脑CCK-AR mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑CCK-AR mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组表达量低于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组胃组织CCK-AR mRNA相对表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织CCK-AR mRNA相对表达量显著下降(P<0.01);其中疏肝和胃汤低、中、高剂量组表达量低于氟西汀组(P<0.01或P<0.05)。
④与空白组比较,模型组下丘脑室旁核 CCK-AR 阳性表达区域面积增加(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组下丘脑室旁核CCK-AR阳性表达区域面积显著减少(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组阳性面积均小于氟西汀组(P<0.01)。
与空白组比较,模型组下丘脑室旁核 CCK-AR 阳性区域占总面积比例升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝和胃汤低、中、高剂量组CCK-AR阳性区域占比下降(P<0.05);疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
⑤与空白组比较,模型组胃组织中 CCK-AR 平均荧光密度升高( P<0.01 );与模型组比较,疏肝和胃汤中、高剂量组胃组织中CCK-AR平均荧光密度下降(P<0.01或P<0.05);其中疏肝和胃汤高剂量组荧光密度小于氟西汀组(P<0.01)。
结论:
(1)Citespace分析的抑郁症与胃排空、摄食之间的相关性和中医肝郁犯胃的具有高度相似性。抑郁症与胃排空及摄食的关联机制可能是应激刺激下丘脑分泌 CRF,通过神经-内分泌机制或奖赏环路抑制摄食及胃排空。NPY、Leptin、Ghrelin、Orexin、CCK参与应激导致的胃排空延迟及摄食行为改变。
(2)抑郁模型大鼠摄食冲动下降及胃排空延迟可能与下丘脑、胃组织Ghrelin、Orexin水平下降、CCK水平上升;血清NPY、Ghrelin、Orexin 含量下降,Leptin、CCK 含量上升;下丘脑室旁核 Y1 受体、OX1-R表达下降,CCK-AR表达上升;下丘脑弓状核GHS-R表达下降;胃组织中GHS-R、OX1-R表达下降,CCK-AR表达上升有关。(3)疏肝和胃汤可通过升高抑郁模型血清NPY、Ghrelin、Orexin水平,降低CCK、Leptin水平;升高下丘脑及胃组织中Ghrelin、Orexin水平及其mRNA表达,降低CCK水平及其mRNA表达;升高弓状核中GHS-R及其mRNA表达;升高室旁核中Y1受体、OX1-R及其mRNA表达,降低CCK-AR及其mRNA的表达。
(4)中医“肝郁犯胃证”的机制可能与应激导致血清、下丘脑、胃组织中NPY、Leptin、Ghrelin、Orexin、CCK水平的变化及其下丘脑、胃组织中相应受体表达的异常改变有关。