【摘 要】
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目的探究转录因子Runx2和Osterix的过表达对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)成骨分化的调控作用,以及高镁离子浓度环境对大鼠骨髓间充质干
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目的探究转录因子Runx2和Osterix的过表达对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)成骨分化的调控作用,以及高镁离子浓度环境对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)成骨分化的作用。方法通过构建慢病毒载体,将Runx2和Osterix基因分别转染入HUVECs;在体外模拟高浓度镁离子浓度环境培养大鼠骨髓间充质干细胞。通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、半定量活性、q PCR、蛋白免疫印迹、免疫荧光染色检测成骨相关标志基因、蛋白的表达变化情况及相关作用机制。结果1.HUVECs转染Runx2过表达慢病毒后,ALP活性提高,成骨相关基因Runx2、OSX、ALP、BSP、OPN及OCN的转录水平上调,同时Runx2、OSX、OPN及OCN的蛋白表达水平亦有所上调。而HUVECs转染OSX过表达载体后,ALP活性未见明显增强。2.高浓度镁离子环境下大鼠间充质干细胞的ALP活性提高,成骨相关基因Runx2,OCN,BSP等转录水平上调,同时OCN的蛋白表达量也增高。另外高镁环境下细胞内ERK蛋白磷酸化水平也有所上调。结论Runx2基因的过表达更有利于HUVECs的成骨分化。高浓度镁离子浓度环境利于间充质干细胞的成骨分化,且是通过激活ERK通路引起的。
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