肝内胆管癌PD-L1表达的临床意义及PD-L1在小鼠肝内胆管癌原位模型中的实验研究

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目的:观察PD-L1分子在临床肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma ICC)患者组织中的表达;观察并分析PD-L1、IFN-γ、TNF-α、VEGF在ICC小鼠原位模型中的表达;观察PD-L1抗体对小鼠ICC原位模型的治疗效果。方法:选取2014年1月至2017年12月就诊于蚌埠医学院第一附属医院并且接受手术治疗的60例ICC患者癌症组织并选取其中40例癌旁组织作为对照,采用免疫组织化学法检测ICC肿瘤组织及癌旁组织中PD-L1分子的表达情况,并分析PD-L1表达与临床病理因素之间的关系;取诱癌质粒p T3-myr-AKT-HA、p T3-EF1a-NICD1、C-luc-SB13溶于2m L0.9%Na Cl溶液中,7s内将含有此3种质粒的0.9%Na Cl溶液利用水流动力学方法注射至小鼠体内,建立小鼠ICC原位模型;通过小动物活体光学成像系统以及小动物B超观察肿瘤模型构建结果,取荷瘤小鼠ICC肿瘤组织进行HE染色,证明其造模情况;取正常肝脏组织及荷瘤小鼠ICC肿瘤组织,检测PD-L1及肿瘤微环境相关因子IFN-γ、TNF-α、VEGF浓度,运用Pearson相关系数法分析PD-L1与IFN-γ、TNF-α、VEGF之间的相关性;对ICC小鼠给予PD-L1抗体治疗,通过小动物活体光学成像系统、小动物B超观察PD-L1抗体治疗效果。结果:PD-L1分子在ICC组织中阳性率为51.7%,在癌旁组织中阳性率为5%,PD-L1分子在ICC中的表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(51.7%vs5%,P<0.05);PD-L1表达与患者性别、年龄、肿瘤直径及分化程度无关,差异无统计学意义(P>0.05),PD-L1表达与ICC患者淋巴结转移情况及TNM分期有关,差异有统计学意义(P<0.05)。4周后小鼠全部成瘤,成瘤率100%,经小动物活体光学成像系统观测,荷瘤小鼠肝脏部位显示强生物发光;经小动物B超观测,荷瘤小鼠肝脏部位可见液性暗区及肿块回声;HE染色结果显示,荷瘤小鼠肿瘤组织切片中肿瘤细胞呈胆管样排列。ELISA结果表明PD-L分子在ICC小鼠中呈高表达,其表达与肿瘤微环境相关因子IFN-γ、TNF-α、VEGF具有线性关系。经小动物活体光学成像系统检测,荷瘤小鼠经PD-L1抗体治疗后肝脏部位生物发光信号减弱;经小动物B超观测,荷瘤小鼠经PD-L1抗体治疗后肝脏部位液性暗区缩小。结论:PD-L1分子在ICC组织中呈高表达,在癌旁组织中呈低表达或不表达,其表达与患者性别、年龄、肿瘤直径及分化程度无关,与ICC患者淋巴结转移情况及TNM分期有关;PD-L1分子在ICC小鼠中呈高表达,其表达与ICC肿瘤微环境细胞因子相关;PD-L1抗体对小鼠ICC原位模型具有一定治疗作用。
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