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目的本论文旨在研究miR-181a对慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)干/祖细胞生长和酪氨酸激酶抑制剂(TKI)反应的影响,并初步探讨其作用机制。CML是由BCR/ABL融合基因诱发的人类恶性血液肿瘤。部分临床患者在接受靶向BCR/ABL酪氨酸激酶的TKI(比如,伊马替尼/IM)治疗后,仍面临疾病复发和药物耐受的风险。患者体内残存的白血病干/祖细胞是导致治疗失败的重要因素;因此,有必要继续深入研究这些细胞的生长与生存机制。方法(1)分离、纯化健康供体和CML患者骨髓细胞并获得CD34+细胞,检测细胞中miR-181a的表达水平;(2)制备miR-181a及其对照慢病毒,在CML细胞株K562中过表达miR-181a,研究miR-181a对细胞生长及IM反应的影响;(3)研究miR-181a对小鼠BaF3/BCR-ABL细胞增殖能力的影响;(4)经FACS分选获取四组细胞,即 BaF3(scramble)、BaF3(miR-181a)、BaF3(BCR-ABL+scramble)和BaF3(BCR-ABL+miR-181a)细胞,这些细胞与小鼠骨髓单核细胞混合后,经尾静脉注射进入经致死剂量辐照的Balb/C小鼠;以研究miR-181a对BCR-ABL恶性转化BaF3细胞能力的影响;(5)利用对照和miR-181a慢病毒侵染的K562细胞,进行Microarray分析,获取差异表达基因;通过生物信息软件预测miR-181a可能调控的靶基因;(6)通过慢病毒递送miR-181a到K562细胞中,验证靶基因的mRNA和蛋白表达;(7)在健康供体和CML患者CD34+细胞中检测并比较GATA6和SERPINE1的表达;(8)使用K562和CML患者CD34+细胞研究GATA6沉默和SERPINE1沉默对CML细胞生长和IM反应的影响。结果:(1)miR-181a在CML患者CD34+细胞中的表达较正常对照细胞显著降低;(2)miR-181a抑制K562细胞的生长并增强它们的IM敏感性;(3)miR-181a抑制BaF3/BCR-ABL细胞的增殖能力;(4)miR-181a抑制BCR-ABL诱发小鼠白血病生成的能力;(5)依据基因表达谱数据进行验证,证实miR-181a在K562细胞中抑制GATA6和SERPINE1的mRNA和蛋白表达;(6)GATA6和SERPINE1在CML患者CD34+细胞中表达较正常对照细胞显著升高;(7)沉默GATA6或SERPINE1显著抑制K562和CML患者CD34+细胞的生长;并增强K562细胞的IM敏感性。结论miR-181a在CML干/祖细胞中表达显著较正常对照细胞降低;miR-181a能部分通过抑制GATA6和SERPINE1的表达而抑制CML细胞的生长并增强其IM敏感性。