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糖类在植物生长发育各个方面都起着重要的作用,不仅为生命活动提供必需的能量,还作为强有力的信号分子参与调控植物中许多重要基因的表达,从而影响植物的生长发育。
为了研究拟南芥中受蔗糖激活的SnRK1家族的AKIN11基因功能,我们首先克隆得到AKIN11的全长cDNA序列,并将其插入植物表达载体pEGAD的35S启动子下游与GFP基因融合,采用基因枪法导入洋葱表皮细胞进行瞬时表达,首次发现AKIN11基因编码蛋白集中在细胞核内表达。
农杆菌介导花序浸泡法转化野生型拟南芥,经过Basta筛选和RT-PCR鉴定,培育得到两个AKIN11基因过量表达,遗传稳定的T3代转基因株系。普通培养条件下观测,发现突变体和野生型的表型没有明显差异;但通过测定它们碳水化合物的含量,发现突变体中叶片的淀粉含量较野生型都有不同程度的升高。当光照12 h后达到最大差异,比野生型叶片淀粉含量增加了30%,但是叶片蔗糖的含量则无明显变化。同时用RT-PCR分析蔗糖和淀粉合成途径中关键调控酶(FBPase、SPS、SUS、AGPase和α-淀粉酶)的mRNA水平,发现突变体中腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的小亚基ApS1 转录水平上升,而其它基因的变化不明显。研究表明AKIN11基因可能是ApS1的正调控因子,通过促进ApS1基因在mRNA水平上的表达而提高淀粉合成途径中腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的丰度,因而在拟南芥碳水化合物代谢和淀粉生物合成途径中起着重要的调节作用。
为进一步研究AKIN11基因的功能,用RT-PCR 分析野生型拟南芥中AKIN11基因表达模式,发现该基因表达具有组织特异性,在花中的表达量最高;在拟南芥的各个发育阶段,AKIN11的表达量则无明显变化。这说明该基因表达不具备明显的时空特异性。