目的：从声带息肉、成人型喉乳头状瘤到喉鳞状细胞癌三组患者中致癌基因Survivin和抑癌基因PTEN的表达差异，以探讨喉鳞状细胞从增生到癌变的变化规律，为金喉片治疗喉癌的合理应用建立参考依据。在此基础上，观察具有活血化瘀功效的金喉片对血瘀证模型大鼠的血液流变学和血脂的影响，以及对喉癌裸鼠移植瘤中survivin和PTEN的影响，以此来了解金喉片的活血化瘀作用、抑制喉癌的功效及作用途径。　　方法：⑴选取符合临床与病理诊断患者的声带息肉18例、成人型喉乳头状瘤10例和喉鳞状细胞癌18例，将每个患者的病理蜡块标本各连续切片三张，分别进行HE染色，Survivin和PTEN免疫组化检测（前者用DAB染色，后者用AEC染色），比较致癌基因Survivin和抑癌基因PTEN在声带息肉、喉乳头状瘤和喉鳞癌三组患者鳞状上皮细胞中的表达差异以及在同种疾病中两种基因的表达差异。采用同一倍数下拍摄同一病理标本同一目标区域的方法对人的Survivin和PTEN基因蛋白表达差异进行直观比较，通过分析了解Survivin和PTEN在三种不同疾病中的表达关系以及在不同分化程度的喉癌中的表达差异，为探讨喉癌变的规律提供实验依据。⑵将随机分组的32只雄性SD大鼠通过综合运用注射肾上腺素、冰水浸泡、高脂饮食和饮水量控制四种方法进行为期14天的血瘀证造模，按70Kg人和200g大鼠间体表面积折算后的金喉片常规有效剂量的1倍、3倍和6倍分别对低、中、高剂量组造模后的大鼠进行为期14天的灌胃，并设立生理盐水对照组，观察在造模开始前、造模后及用药后大鼠血液流变学、血脂和舌象的变化差异，以此来了解金喉片活血化瘀的作用机制。⑶将培养好的1×108个/ml浓度的喉癌细胞按0.2ml/只接种到随机分组的裸鼠（雌雄各半）背部皮下，按70Kg人和20g裸鼠间体表面积折算后的金喉片常规有效剂量的1倍、3倍和6倍分别对低、中、高剂量组裸鼠进行为期28天的灌胃，并设立生理盐水对照组，观察裸鼠背部瘤体体积与形态变化。在第28天取瘤，并进行瘤体重量和体积测量，分析瘤体密度；然后将各瘤体制成蜡块标本，切片后进行致癌基因survivin和抑癌基因PTEN的免疫组化检测，分析同一瘤体切片中Survivin和PTEN的表达差异，以此来了解金喉片抑癌的作用效果和作用途径。　　结果：①声带息肉组的Survivin和PTEN阳性率均显著低于成人型喉乳头状瘤组和喉鳞状细胞癌组（P<0.01），而成人型喉乳头状瘤组的Survivin和PTEN阳性率均低于喉鳞状细胞癌组，但均没有显著性差异（P>0.05），两种免疫组化形成近似声带息肉＜成人型喉乳头状瘤＜喉鳞状细胞癌的表达规律。在声带息肉、成人型喉乳头状瘤及喉鳞状细胞癌三种疾病中，PTEN的阳性率均显著低于Survivin（P<0.01），且两者呈正相关关系。Survivin和PTEN在声带息肉、喉乳头状瘤及喉鳞状细胞癌的鳞状细胞中都有阳性表达，并且主要集中在弱阳性、阳性和中度阳性，在强阳性表达方面 Survivin要略多于 PTEN。在喉鳞状细胞癌中，Survivin的阳性表达主要集中在中度阳性和强阳性，而PTEN的阳性表达则主要集中在阳性和中度阳性。②经过改进的血瘀证造模方法，使SD大鼠发生了一系列符合血瘀证的病理改变，主要表现在以下两个方面：第一，舌质颜色改变：大鼠舌体的颜色由初始的淡红逐渐向紫黑转变，至造模14天后最终呈紫黑持续状态，造模后大鼠舌体血瘀程度与造模前具有非常显著的差异(P0.05）。与用药前对比后发现，空白组的血浆粘度较用药前（1.1013mPa·s）还稍微有所上升，而其他三组在喂服了金喉片后均较用药前有所降低，说明药物起到了降低血浆粘度的作用，并且低剂量的金喉片效果最好，高剂量和中剂量虽然也发挥了作用，但未能体现出与不用药之间显著的差异。③喉癌裸鼠模型的背部瘤体多呈菜花样、花瓣状或分叶状，表面可见细小血管附着，血管多与背部皮下动静脉相通；瘤体表面有半透明包膜覆盖，菲薄易破，瘤体与背部皮肤及肌肉未见粘连，无周围组织侵犯，瘤体生长集中，未见散在式生长。切开瘤体后肉眼可见瘤体表面覆盖一层质密包膜，包膜下可见乳白色胶冻状状瘤体组织，质脆易碎。镜下见瘤体细胞胞浆丰富，伴有不规则的深染的核，位于中央，细胞边界清楚，可见部分角化。喉癌细胞常表现粘附性聚集，也有部分表现为散在分布。瘤体表面可见纤维样组织排列，肿瘤可表现巨大，部分伴有空洞形成，中央可见大片坏死，伴钙盐沉着，未见周围组织浸润。瘤体呈膨胀性生长，团块状分布，球状外生，圆形突起。按照高剂组3300mg/Kg的剂量服用金喉片的裸鼠其背部皮下的喉癌移植瘤瘤体体积最小，重量最轻，与空白对照组之间具有显著的差异性（P<0.05）。全部裸鼠背部瘤体的平均密度为1.202g/cm3。在免疫组化中，Survivin阳性主要表现为细胞浆和细胞核同时染色，PTEN阳性则主要是细胞核染色。因两者均用DAB染色，故均以棕黄色为主，少量强阳性表现为棕褐色。Survivin和PTEN在瘤体中的阳性率均体现出高剂组＜中剂组＜低剂组＜空白组的规律特点，且两者的阳性率呈正相关关系。　　结论：⑴Survivin和PTEN在人体喉良性增生性疾病的鳞状细胞中部分表达，而在良性肿瘤和恶性肿瘤中过度表达，体现出随恶性程度增加而逐渐升高的趋势。在声带息肉、喉乳头状瘤及喉鳞状细胞癌三种疾病中，Survivin的阳性率均显著高于 PTEN。虽然Survivin和PTEN都能够在人喉鳞癌中高表达，但Survivin和PTEN在中分化喉鳞癌中的阳性率要明显高于高分化喉鳞癌。⑵常规有效剂量的金喉片能够通过升高高密度脂蛋白和降低低密度脂蛋白来显著降低血瘀证模型大鼠的血浆粘度及改善其舌体血瘀程度，从而达到改善血瘀证的目的，用药剂量增大至3倍和6倍时血浆粘度改善不明显。2周时间6倍及以下有效剂量金喉片没能够起到减少红细胞数量的作用，对红细胞的体积也没有体现出显著的影响，未能对血瘀证大鼠红细胞间的摩擦力起到明显的降低作用，对改善红细胞的变形能力和聚集性影响不大，也未能有效降低大鼠的的甘油三酯和总胆固醇。金喉片改善大鼠血瘀证的机制可概括为：通过协助将各组织中的胆固醇送回肝脏代谢，帮助部分清除了血管壁中多余的胆固醇；通过对抗体内低密度脂蛋白被氧化的作用，减少了泡沫细胞的形成；通过促进纤维蛋白溶解、抑制血小板聚集等方式抑制了血栓的形成；通过降低脂蛋白引起的异常血管反应保护了血管内皮功能；通过减少低密度脂蛋白的生成，降低了胆固醇从肝脏过量运送到全身组织的可能，造成低密度脂蛋白所携带的胆固醇失去积存在动脉壁上的机会，由此降低了血浆粘度，发挥出改善血瘀证的作用。⑶6倍有效剂量的金喉片则能够有效抑制喉癌裸鼠移植瘤的生长，并且降低致癌基因Survivin在癌瘤中的表达，抑癌基因PTEN的阳性表达始终低于Survivin，表现出一种从属性的应激表达模式。如果Survivin基因在喉癌组织中正常表达，其能够抵抗喉癌细胞凋亡，会导致喉癌细胞无限增殖，正是由于Survivin基因受到高剂量金喉片的持续影响，降低了其在瘤体中的表达，增加了喉癌细胞逃逸生长监控并继续分裂的难度，随着喉癌细胞生成的减少，裸鼠背部皮下的瘤体也随之变小。3倍及以内的口服剂量对于Survivin的阳性表达并不能造成实质性的影响，不仅瘤体重量和体积不会因此而有明显减小， Survivin基因的阳性表达也不会受到显著的抑制。PTEN能够维持正常的物质代谢和内环境自稳态，抑制喉癌细胞周期进展，促进喉癌细胞凋亡，抑制喉癌瘤体的血管形成和侵袭，起到阻止喉癌发展和抑制瘤体增大的作用。高剂量金喉片组 PTEN阳性率最高，瘤体的平均体积最小，这也符合高表达的PTEN的作用效果。Survivin的阳性表达引起了PTEN的应激性阳性表达，在致癌基因大量发挥作用的同时，PTEN出于竞争目的也追随其表达，但因Survivin在主导癌瘤发展方向方面作用更强，从而出现PTEN始终低于Survivin的情形。