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目的：通过AM12质粒(含HBV3.2kb全基因组)转染体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)，观察HK-2细胞表型转化、凋亡、Fas表达及对转化生长因子-β1(TGF-β1)分泌的影响，初步探讨乙型肝炎病毒(HBV)在乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)肾损伤中的作用及机理，为临床预防或/和治疗HBV-GN提供实验性理论依据。
方法：将HK-2细胞于培养瓶中培养至80％-90％融合，0.25％胰酶消化，以1×106/ml传代于细胞培养板中，在37℃、5％CO2、95％空气的条件下贴壁并培养至80％-90％融合后，以含HBV3.2 kb全基因组的AM12质粒转染HK-2细胞为转染组，以正常HK-2细胞作为阴性对照组、HK-2细胞与慢性乙肝患者血清共同培养作为阳性对照组：
1．将HK-2细胞以1×106/ml传代于24孔培养板中，以AM12质粒转染HK-2细胞，37℃、5％CO2、95％空气的条件下继续培养5天，采用时间分辨免疫荧光法检测HBsAg、HBeAg的表达；
2．将HK-2细胞以1×106/ml传代于6孔培养板中，分对照组、转染组，以37℃、5％CO2、95％空气的条件继续培养3天后，以0.25％胰酶消化收集细胞，70％冷酒精固定24小时，用PBS重悬细胞，调节细胞浓度约1×106/ml，碘化丙啶(PI)避光染色1小时，以流式细胞仪检测HK-2凋亡情况；
3．将HK-2细胞以1×106/ml传代于6孔培养板中，分对照组、转染组，以37℃、5％CO2、95％空气的条件继续培养3天后，以0.25％胰酶消化收集细胞，用PBS重悬细胞，调节细胞浓度约1×106/ml，加入CD95-FITC鼠抗人单克隆抗体，室温避光反应20分钟，以流式细胞仪检测HK-2 Fas表达情况；
4．将HK-2细胞以1×106/ml传代于24孔培养板中，分对照组、转染组，以37℃、5％CO2、95％空气的条件继续培养3天后，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度。于波长450nm的酶标仪上读取标准品OD值，以标准品OD值与标准品0点OD值的比率为纵坐标，以标准品的浓度为横坐标，采用SPSS软件拟合标准曲线，通过检测标本的OD值在标准曲线上查出其浓度值；
5．将HK-2细胞以1×106/ml传代于预置玻片的6孔培养板中，分转染组、阳性对照组、阴性对照组，以37℃、5％CO2、95％空气的条件继续培养3天后，取出玻片进行免疫组化染色，检测角蛋白(CK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达，胞浆呈棕黄色为阳性，并对染色后细胞进行显微镜下观察，摄片，Image-Pro Plus软件分析平均光密度，进行相对定量。
结果：
1．转染5天后可在其中一孔中检测到乙肝抗原的表达，其HBsAg的荧光强度为73245，浓度为5.377 ng/ml；HBeAg的荧光强度为92746，浓度为0.890NCU/ml。
2．对照组HK-2凋亡率为1.03±0.09％，转染组为1.49±0.02％，转染组凋亡率高于对照组(P<0.05)。
3．对照组HK-2Fas表达率为6.58±0.65％，转染组为10.09±2.34％，转染组HK-2 Fas表达率明显高于对照组(P<0.05)。
4．阴性对照组TGF-β1水平为210.28±47.21pg/ml，转染组为283.85±61.12 pg/ml，转染组TGF-β1水平高于对照组(P<0.05)。
5．阴性对照组HK-2角蛋白表达强阳性，阳性对照组与转染组呈弱阳性，平均光密度值分别为0.078±0.017、0.068±0.029、0.069±0.035，u值分别为12.000(阴性组vs.转染组)、4.067(转染组vs.阳性组)，差异均有显著性(P<0.05)；阴性对照组α-平滑肌肌动蛋白表达阴性，阳性对照组与转染组呈强阳性，平均光密度值分别为0.034±0.011、0.122±0.031、0.094±0.037，u值分别为26.914(阴性组vs.转染组)、10.045(转染组vs.阳性组)，各组间比较差异有显著性(P<0.05)。
结论：
1．含3.2kb全基因组的HBV-DNA质粒可转染人肾小管上皮细胞，并引起肾小管上皮细胞损伤。
2．HBV-DNA质粒转染人肾小管上皮细胞可导致肾小管上皮细胞凋亡增加，Fas表达升高。
3．HBV-DNA质粒转染人肾小管上皮细胞可引起TGF-β1分泌增加。
4．HBV-DNA质粒转染人肾小管上皮细胞可导致肾小管上皮细胞转分化。
故推测乙肝病毒可在肾小管上皮细胞原位复制及表达，并通过Fas/FasL途径介导肾小管上皮细胞凋亡及发生上皮．间叶的转分化，引起肾小管上皮细胞损伤，使TGF-β1分泌增多，反过来又促进肾小管上皮细胞表型转化和凋亡增加，造成肾小管上皮细胞的进一步损伤。