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卵巢功能衰退是指由于女性卵巢的生殖功能和内分泌功能下降导致月经紊乱、生育力下降及低雌激素症状的发生,也可称为卵巢储备功能下降(Decreasing Ovarian Reservation,DOR),包括围绝经期卵巢功能衰退和卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)。卵巢功能衰退意味着女性开始进入衰老,严重影响着女性生殖健康及预期健康生命质量。因此探寻卵巢衰老中内在分子机制,寻找靶向目的蛋白改善卵巢功能从而延缓卵巢功能衰退具有重大意义。卵巢功能衰退存在极大的个体差异性,提示卵巢内微环境起着重要作用,本课题以绝经过渡期雌性大鼠为研究对象,着眼于与卵巢功能密切相关的转化生长因子-β(trans-forming growth factorβ,TGF-β)信号通路中的细胞内信号转导蛋白Smad蛋白,探究在卵巢功能衰退中受体激活型Smad蛋白Smad2、Smad3及抑制型Smad蛋白Smad7的蛋白水平及基因水平的表达变化,初步研究Smad蛋白与卵巢功能衰退的关系。本课题选取阴道涂片筛选法验证的12月龄绝经过渡期雌性SD(Sprague-Dawley)大鼠28只,,随机分成绝经过渡期组(MT)、雌二醇治疗绝经过渡期组(E2),每组14只,另选14只6月龄雌性大鼠作为性成熟对照组(C)。E2治疗组皮下注射17-β雌二醇(0.2mg/kg,1次/3天),MT组及C组皮下注射同等剂量的芝麻油溶剂6周后取双侧卵巢,计算卵巢指数、行HE染色观察卵巢形态和卵泡数量计数评估各组卵巢功能,通过实时荧光定量PCR法检测Smad2,Smad3,Smad7基因在各组卵巢组织中的mRNA表达差异,免疫组织化学方法检测Smad2、P-Smad2、Smad3、P-Smad3、Smad7蛋白的在各组卵巢中的定位和表达变化。根据卵巢指数及形态学计算各级卵泡数量结果发现MT组及E2组卵巢功能较C组降低,MT组卵巢功能为最低,结果有统计学意义(P<0.05)。RT-q PCR结果显示MT组、E2组Smad2 mRNA、Smad3mRNA表达水平显著低于C组(P<0.01),E2组Smad2、Smad3 mRNA水平显著高于MT组(P<0.05);Smad7 mRNA水平在MT组、E2组中显著高于C组(P<0.01),E2组低于MT组(P<0.05)。免疫组织化学结果表明Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3及Smad7蛋白在颗粒细胞、卵母细胞及卵泡膜细胞中均有表达,三组间有表达差异。Smad2,Smad3蛋白水平在C组、E2组、MT组中呈逐渐下降趋势,具有统计学意义(P<0.05),相同P-Smad2、P-Smad3蛋白水平呈相同趋势,结果无统计学意义;而Smad7蛋白水平在C组、E2组、MT组呈升高趋势,具有统计学意义(P<0.05)。通过对以上结果分析得出,Smad2、Smad3、Smad7在卵巢卵泡细胞中广泛表达,对卵巢功能起调控作用。在卵巢功能衰退过程中,无论从蛋白水平及基因水平,均有Smad2,Smad3,Smad7参与,Smad2、Smad3起正向调控,Smad7起负向调控作用。卵巢功能衰退与Smad2,Smad3表达下调,Smad7表达上调有关。