DPP-4抑制剂西格列汀对高糖作用下大鼠肾小球内皮细胞MBL途径的影响

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目的:通过体外细胞实验,探讨DPP-4抑制剂西格列汀(Sitagliptin,Sig)是否能够通过抑制高糖作用下大鼠肾小球内皮细胞(Rat renal glomerular endothelial cells,r RGECs)甘露聚糖结合凝集素(Mannose-binding lectin,MBL)途径的激活,达到减少补体C3和炎症介质NF-κB表达的作用。方法:将r RGECs分为:正常糖组(5.5mmol/L葡萄糖,NG组)、甘露醇组(5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇,MG组)、高糖组(30mmol/L葡萄糖,HG组)和高糖+Sitagliptin组(30mmol/L葡萄糖+10μmol/L Sitagliptin,HG+Sig组)。采用CCK8法检测西格列汀的最佳药物浓度及各组r RGECs的活性。免疫细胞化学法(Immunocytochemistry,ICC)检测各组CD26、MBL-A、MBL-C、C3及NF-κB蛋白的定位及表达情况。采用(Real-Time polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测各组CD26及NF-κB的m RNA表达情况。采用蛋白印迹法(Western Blot,WB)检测各组CD26、MBL-A、MBL-C、C3及NF-κB蛋白的表达情况。结果:1、采用CCK8法检测药物的最佳浓度,用不同浓度的药物干预HG组24h后得出西格列汀的最佳浓度为10μmol/L。2、CCK8法检测各组r RGECs的活性,结果表明,HG组与NG组、MG组及HG+Sig组相比,细胞活力明显下降(P<0.05),余组间细胞活力差异无统计学意义(P>0.05)。3、ICC检测结果:CD26、MBL-A、MBL-C、C3及NF-κB主要在r RGECs胞浆中表达,与NG组和MG组相比,HG组r RGECs内上述指标的蛋白表达均升高(P<0.05),与HG组相比,HG+Sig组r RGECs内上述指标的蛋白表达均下降(P<0.05),余组间上述指标的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。4、RT-PCR检测结果:与NG组和MG相比,HG组r RGECs内CD26、NF-κB的m RNA表达均升高(P<0.05),与HG组相比,HG+Sig组r RGECs内上述指标的m RNA表达均下降(P<0.05),余组间上述指标的m RNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。5、WB检测结果:与NG组和MG相比,HG组r RGECs内CD26、MBL-A、MBL-C、C3及NF-κB的蛋白表达均升高(P<0.05),与HG组相比,HG+Sig组r RGECs内上述指标的蛋白表达均下降(P<0.05),余组间上述指标的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在高糖作用下,r RGECs的CD26、NF-κB的m RNA和CD26、MBL-A、MBL-C、C3及NF-κB的蛋白表达均明显增加。DPP-4抑制剂Sitagliptin干预后,r RGECs中的以上指标表达均明显下降,Sitagliptin可能通过减少CD26与MBL识别和结合,进一步抑制MBL补体途径激活,达到减少补体C3和炎症介质NF-κB表达的作用,从而进一步减轻r RGECs炎症反应及损伤。
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