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目的利用HBx逆转录病毒感染人正常肝细胞L02与人肝癌细胞HepG2,构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的L02与HepG2细胞。观察比较HBx对L02与HepG2细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响,同时检测糖原合成酶激酶3β(GSK3β)表达及活性在两株细胞中的改变,探讨HBV相关性肝癌(HCC)的发病机制。方法构建HBx逆转录病毒,分别感染L02与HepG2细胞,在基因和蛋白水平上确定HBx在细胞中的稳定表达;MTT法检测L02与HepG2细胞的增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率以及细胞周期中各时相所占比例;Western blot法检测t-GSK3β、p-GSK3β、β-catenin以及CyclinD1的蛋白表达水平。结果成功构建HBx逆转录病毒,感染L02与HepG2细胞,经抗生素筛选得到阳性细胞,通过RT-PCR和Western blot在RNA以及蛋白水平上检测到HBx在两株细胞中的稳定表达;MTT法和流式细胞术检测到L02-HBx细胞增殖率随着时间的增加而增加,G1期细胞周期相比例较对照组减少,G2期较对照组增加,细胞凋亡率减少(P<0.05);MTT法和流式细胞术检测HepG2-HBx细胞增殖不明显,与对照组相比其S期比例增多,但G2期比例明显减少(P<0.05),同时细胞凋亡率增多;L02-HBx细胞与对照组相比,t-GSK3β在mRNA水平和蛋白水平上表达均无明显变化,p-GSK3β、β-catenin以及CyclinD1蛋白的表达增加(P<0.05);HepG2-HBx与对照组相比t-GSK3β在mRNA水平和蛋白水平上均增加,p-GSK3β、β-catenin以及CyclinD1蛋白的表达无明显改变。结论1.逆转录病毒在体外能有效感染人肝细胞系L02与HepG2,成功构建稳定表达HBx蛋白的L02-HBx细胞与HepG2-HBx细胞模型。2. HBx对L02细胞有促进增殖,加速细胞周期,抑制凋亡的作用。3. HBx对HepG2细胞有抑制增殖,阻滞细胞周期于S期并促进凋亡的作用。4.HBx可能通过参与激活L02细胞中的Wnt信号通路,使GSK3β发生磷酸化,抑制GSK3β的活性,引起β-catenin的积聚,从而激活下游相关转录基因,促进细胞的增殖。5.HBx可以促进HepG2细胞中GSK3β蛋白的表达,可能参与其它信号通路诱导细胞的凋亡。