明胶—透明质酸—纳米羟基磷灰石支架材料修复大鼠颌骨缺损的实验研究

来源 :华北理工大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wohaha163
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目的通过对复合支架材料理化性能检测及建立动物模型进行组织学观察来评价明胶(Gelatin,G)-透明质酸(Hyaluronic acid,HA)-纳米羟基磷灰石(Nanohydroxyapatite,n HAP)支架材料修复大鼠颌骨临界骨缺损的能力,探讨G-HAn HAP作为骨诱导材料的可行性,为临床修复骨缺损应用该支架材料提供理论基础和依据。方法通过冷冻干燥和化学交联法相结合制备G-HA-n HAP支架材料,通过扫描电镜(Scanning electron microscope,SEM)对材料的表面形态进行观测,对材料的孔径、孔隙率、吸水率和体外降解率进行测量和分析。45只8周龄健康的雄性SD大鼠,体重达(230±20)g,清洁级,经普通饲料喂养后,按照完全随机分组法随机分成3组,分别为实验组、纳米羟基磷灰石组、空白组,每组动物15只。所有动物均于下颌第一、二磨牙之间建立双侧下颌骨缺损,3mm×3mm×3mm大小,实验组缺损区放G-HA-n HAP仿生支架材料,对照组缺损区放纳米羟基磷灰石,空白组缺损区不放置任何材料。术后分别于第4、6、8周时,从每组中随机选取5只动物,处死,大体观察缺损区愈合状态,组织学观察,MASSON染色,免疫组化染色I型胶原(Collagen,I)在缺损区的表达和分布,Image-Pro Plus6.0(IPP 6.0)软件在同一倍数下测量缺损区的新生骨面积比,及I型胶原阳性表达部位的平均光密度值(Mean optical density,MOD),各组间进行统计学比较分析。结果1成功制备G-HA-n HAP支架材料。扫描电镜显示支架的多孔结构和纤维形貌,图片显示,支架材料表面凹凸不平,疏松多孔,孔隙贯穿,孔径均匀,平均孔径为80.50μm,平均孔隙率是96.23%,平均吸水率是42.16%,降解率良好,为细胞的粘附、延展、增殖和分化提供了良好的物理支撑和空间。2成功的建立了大鼠下颌骨骨缺损模型,缺损大小符合临界骨缺损的标准。3大体观结果:4周时,实验组缺损区部分已形成纤维性愈合,对照组缺损区有结缔组织覆盖,空白组缺损部位明显,呈孔洞状;6周时,实验组缺损区有骨样组织覆盖,对照组,缺损边缘已有少量骨样组织,缺损区中心纤维结缔组织覆盖,空白组缺损区有软组织覆盖;8周时,实验组缺损修复已完成,表面光滑连续,与正常骨组织无明显界限,对照组,缺损基本愈合,表明粗糙,与周围界限明显,空白组缺损区修复未完成,骨样组织充填。4 HE染色结果分析:实验组早期出现大量的成骨细胞和骨细胞,骨小梁形成较多较快,炎细胞较对照组和空白组较少。5新生骨面积比结果比较:各组组内比较,新生骨面积比都随着时间的增长而增大。组间比较,第4、6、8周时,实验组的新生骨面积比均大于对照组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。6Masson染色结果分析:实验组的新生骨形成较快较多,且向成熟骨的转化较空白组与对照组较快。7免疫组化结果分析:同组间I型胶原的MOD值,随着时间的增长而增大,不同组对比,各个时间段实验组的MOD值均高于对照组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。8标本大体观和组织学各项检测结果相符合。结论1本实验成功的制备了G-HA-n HAP复合支架材料,有良好的理化性质。2本实验证明了G-HA-n HAP支架材料可以促进骨组织缺损的修复。图47幅;表3个;参101篇。
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