【摘 要】
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研究目的:近年来,在肿瘤研究中常有报道长链非编码RNA在多种肿瘤的发生发展中扮演重要角色,针对长链非编码RNA来设计靶向治疗药物的研究亦越来越多。本研究旨在揭示长链非编码RNA OIP5-AS1通过调节miR-30a-5p降低FOXD1和ERK1/2的表达水平抑制食管鳞癌细胞增殖的分子机制。阐述:1.长链非编码RNA-OIP-AS1与miRNA-30a-5p的结合和调控关系,2.miRNA-30a
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研究目的:近年来,在肿瘤研究中常有报道长链非编码RNA在多种肿瘤的发生发展中扮演重要角色,针对长链非编码RNA来设计靶向治疗药物的研究亦越来越多。本研究旨在揭示长链非编码RNA OIP5-AS1通过调节miR-30a-5p降低FOXD1和ERK1/2的表达水平抑制食管鳞癌细胞增殖的分子机制。阐述:1.长链非编码RNA-OIP-AS1与miRNA-30a-5p的结合和调控关系,2.miRNA-30a-5p对FOXD1表达的负向调控,3.FOXD1对ERK1/2表达的调控关系,4.ERK1/2的表达水平对食管癌细胞表型的影响。研究方法:首先通过q-PCR（基因扩增）,WB（蛋白印迹）,IHC（免疫组化）检测临床样本中食管癌组织和正常组织内RNA-OIP-AS1和miRNA-30a-5p的表达水平,研究它们与食管癌的关系以及它们之间的相关性,并且检测它们在食管癌细胞和正常细胞中的表达情况。其次,用WB,q PCR检测FOXD1在食管癌细胞和正常细胞中的表达情况,通过在食管癌细胞中抑制LncRNA-OIP-AS1检测miRNA-30a-5p的表达水平,分析它们的调控关系,上调miRNA-30a-5p检测FOXD1的表达水平,并且在Targetscan数据库中预测和采用双荧光素酶报告基因检测,分析miRNA-30a-5p与FOXD1的相互作用,通过过表达和抑制miRNA-30a-5p,检测FOXD1的表达变化,以确定miRNA-30a-5p与FOXD1的调控关系。然后抑制FOXD1,检测ERK1/2的表达,分析FOXD1对ERK1/2的调控关系。抑制ERK1/2的表达,分别用MTT,结晶紫染色,流式细胞术,小室侵袭等实验技术检测食管癌细胞的增殖,细胞克隆形成数目,早期凋亡率,侵袭等,分析ERK1/2的表达水平对食管癌细胞表型的影响。再次,我们抑制RNA-OIP-AS1表达,检测miRNA-30a-5p,FOXD1,ERK1/2的蛋白表达,以及食管癌细胞增殖,凋亡和侵袭能力的变化。最后我们将抑制LncRNA-OIP-AS1的食管癌细胞注射至裸鼠皮下,造模成瘤后,检测瘤体生长速度和大小,取瘤体组织,用WB和IHC检测瘤体组织中FOXD1和ERK1/2的表达,以验证在食管癌细胞水平上的结论。结果:LncRNA OIP5-AS1在食管癌组织和细胞中表达显著高于正常组织和细胞,miRNA-30a-5p则相反,在食管癌组织和细胞中表达显著低于正常组织和细胞。FOXD1在在食管癌组织和细胞中表达显著高于正常组织和细胞,Targetscan预测miRNA-30a-5p与FOXD1的mRNA的3′-UTR有结合区域,双荧光素酶报告基因检测结果表明miRNA-30a-5p与FOXD1有相互作用,并且是负向调节关系。FOXD1表达能够促进ERK1/2的表达,ERK1/2的表达能促进食管癌细胞的增殖,细胞克隆形成和侵袭能力,抑制食管癌细胞的早期凋亡。体内实验表明,抑制LncRNA OIP5-AS1,食管癌细胞成瘤瘤体减小。瘤体组织中FOXD1和ERK1/2的表达显著下降。结论:1.LncRNA OIP5-AS1在食管癌组织和细胞中显著高表达,miRNA-30a-5p则相反。2.LncRNA OIP5-AS1在食管癌细胞中负向调节miRNA-30a-5p。miRNA-30a-5p在食管癌细胞中靶向结合FOXD1的3′-UTR区域,并负向调控制FOXD1的表达。3.FOXD1和ERK1/2在食管癌组织和细胞中显著高表达,FOXD1能正向调控ERK1/2表达,ERK1/2的表达能促进食管癌细胞的增殖,细胞克隆形成,和侵袭能力,抑制食管癌细胞的早期凋亡率。食管癌细胞在裸鼠体内实验与细胞水平结论相同。4.通过抑制LncRNA OIP5-AS1上调miRNA-30a-5p表达来抑制FOXD1和ERK1/2的表达从而达到抑制食管癌细胞的增殖、侵袭、促进凋亡的目的。此结论可能为食管癌的靶向治疗药物开发提供一些新的视野。
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