第一部分NAFLD疾病状态下CYP3A表达与PXR核转位的变化实验目的:非酒精性脂肪性肝病对肝脏的多种药物代谢酶产生影响,其中CYP3A是主要的代谢酶,孕烷X受体(PXR)参与CYP3A转录水平的调节,本实验中我们阐述NAFLD疾病状态下两者表达水平的变化,为后续探讨两者可能存在的相互联系打下基础。材料和方法:动物实验我们选择C57BL/6小鼠,雄性,周龄为7-8周。分别给予正常饮食(SCD)、高脂饮食(HFD)喂养,8周后观察小鼠肝脏的脂肪变性,同时测定两者甘油三脂含量变化。细胞实验我们选择了人肝癌细胞株HepG2细胞,采用棕榈酸(PA)刺激24h诱导非酒精性脂肪性肝病体外模型,并测定甘油三酯含量。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质免疫印记(Western Blot)等手段检测HFD造模小鼠中CYP3A11的mRNA表达,以及PA造模HepG2细胞中CYP3A4的mRNA表达,同时检测两者PXR核转位水平的变化。结果:HFD造模小鼠肝脏中,检测到CYP3A11的mRNA与蛋白表达水平下降,PA造模HepG2细胞中,检测到CYP3A4的mRNA表达水平下降,NAFLD造模小鼠肝脏及HepG2细胞中,检测PXR核转位水平上升。结论:NAFLD疾病下,CYP3A在动物模型及细胞模型中的表达水平是下降的,PXR核转位水平上升。第二部分敲低及过表达PXR对NAFLD造模HepG2细胞中PXR-CYP3A4转录活性及表达的影响实验目的:已有报道认为NALFD疾病下CYP3A的下调是由PXR-FGF21通路发挥,本实验进一步分析敲低及过表达PXR对NAFLD造模HepG2细胞中PXR-CYP3A4转录活性及表达的影响,从而探讨NAFLD疾病中CYP3A表达下降是否和PXR通路相关。材料和方法:体外采用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PXR表达,采用质粒转染技术增强PXR表达,利用qRT-PCR及Western Blot等手段检测PXR表达水平、CYP3A4的mRNA表达水平,利用荧光素酶检测CYP3A4启动子转录活性。结果:siRNA敲低PXR的HepG2细胞中,PA造模仍然抑制CYP3A4启动子转录活性及CYP3A4表达,过表达PXR质粒的HepG2细胞中,PA造模仍然抑制CYP3A4启动子转录活性及CYP3A4表达。结论:CYP3A在NAFLD疾病状态下的表达下调与PXR通路不相关。