基于马占相思单宁的牛蛙中替代抗生素开发研究

来源 :汕头大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:snmn777
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马占相思单宁(AM)作为一种易提取、价格低廉的植物单宁,可以作为替代抗生素的绿色添加剂,在水产养殖业中具有潜在的应用价值,然而在牛蛙中的作用机制不明确。为了解决养殖牛蛙在高密度养殖状况下患病率高的问题,本研究以牛蛙为对象,先通过植物单宁与酸化剂的抑菌效果筛选,筛选出效果最优良的马占相思单宁与甲酸作为初步替代抗生素的添加剂。设置关于马占相思单宁的定性与定量添加剂为期40天养殖实验。通过比较各试验组的存活生长、组织学结构、消化酶活性、免疫应答、抗氧化指标和肠道菌群,以探讨基于马占相思单宁的作为替代抗生素的一种新型牛蛙饲料添加剂。并通过嗜水气单胞菌感染试验,进一步探讨添加马占相思单宁对牛蛙非特异性免疫能力以及嗜水气单胞菌能力的影响。获得的主要结果和结论如下:1.植物单宁与酸化剂的抑菌优良筛选0.4g/L的AM添加水平与0.25g/L的FA添加水平对于牛蛙养殖池水体微生物菌落在6h时的生长抑制率分别为40.68%与49.13%,且显著高于其余添加水平(19%~30%)(P<0.05);而对于单一致病菌(嗜水气单胞菌)的生长抑制作用效果与对于牛蛙养殖池水体微生物菌落的抑制效果基本呈现一致。2.马占相思单宁(AM)与甲酸(FA)对牛蛙生长性能、免疫能力、抗氧化能力和肠道菌群的影响1)在饲料中添加马占相思单宁、马占相思单宁与甲酸混合剂均可提高在恶劣养殖条件下牛蛙的增重率和存活率,且在单独马占相思单宁效果更佳。2)在饲料中添加马占相思单宁、马占相思单宁与甲酸混合剂均可提高牛蛙血清碱性磷酸酶、免疫球蛋白和溶菌酶的活性,降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性;同时增强牛蛙肝脏中抗氧化酶(SOD、T-AOC、GSH、CAT)的活性,并保护牛蛙的肝脏健康,且在单独马占相思单宁效果更佳。3)在饲料中添加马占相思单宁、马占相思单宁与甲酸混合剂可显著下调牛蛙中肝脏和脾脏促炎因子(tnf-α、il-1β)的表达。4)在饲料中添加马占相思单宁、马占相思单宁与甲酸混合剂极大地改变了牛蛙肠道菌群的组成,减少了潜在致病菌的丰度,保护了在恶劣养殖条件下牛蛙肠道的正常功能。3.不同水平马占相思单宁(AM)对牛蛙生长性能、免疫能力及抗氧化能力的影响1)在饲料中添加低中浓度的马占相思单宁可提高在正常养殖条件下牛蛙的增重率和存活率,且在马占相思单宁添加水平为8g/kg效果更佳。2)在饲料中添加低中浓度的马占相思单宁可提高牛蛙血清免疫球蛋白G和免疫球蛋白M的活性,降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性;同时增强牛蛙肝脏中抗氧化酶(SOD、T-AOC、GSH、CAT)的活性,并保护牛蛙的肝脏健康,且在马占相思单宁添加水平为8g/kg效果更佳。3)在饲料中添加低中浓度的马占相思单宁可显著下调牛蛙中肝脏和脾脏促炎因子(tnf-α、il-1β)的表达。的活性显著增强(P<0.05)。4.马占相思单宁(AM)抵抗牛蛙致病菌感染的作用1)通过嗜水气单胞菌感染牛蛙7天后,各组出现死亡,尤其普通饲料组牛蛙的累积死亡率最高,而在饲料中添加抗生素与8g/kg AM后,累积死亡率显著下降。2)通过嗜水气单胞菌感染牛蛙7天后,饲料中添加抗生素与8g/kg AM可显著调鱼体肝脏和脾脏中下调促炎因子(il-1β、il-17、tnf-α)的表达量,促进牛蛙免疫组织的健康,提高牛蛙的免疫能力。总之,本论文的研究结果表明,基于马占相思单宁开发了一种绿色环保的牛蛙饲料添加剂,饲料中添加适量的马占相思单宁可显著提高牛蛙的生长性能、抗氧化和抗病能力,减少牛蛙在恶劣养殖环境的患病几率,并初步阐明了马占相思单宁的抗菌机制,为解决养殖牛蛙抗生素的过度使用问题、促进水产养殖业的健康可持续发展提供重要基础。
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