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背景：异基因骨髓移植(allogeneic bone marrow transplantation, allo-BMT)为一系列恶性和非恶性疾病患者提供了新的希望，然而，有着高发生率和死亡率的移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)是其发展的最大障碍，传统的防治方法是以破坏机体免疫机能或牺牲移植物抗白血病(graft-versus-leukemia,GVL)作用为代价的。研究发现，成熟T细胞在GVHD的发生与发展中起着核心作用，而T细胞活化必须同时存在MHC/抗原肽-TCR和共刺激信号，当缺少或阻断T细胞的共刺激信号，将导致T细胞的无反应(anergy)、细胞凋亡(apoptosis)或克隆丢失(clone depletion)等的发生，从而诱导免疫耐受(immune tolerance),使机体特异性地对该识别过程中的抗原无反应。研究证实，在众多的共刺激信号途径中，作用最明显、最肯定的是B7/CD28途径。因此，干预T细胞B7/CD28共刺激途径，诱导特异性免疫耐受成为GVHD防治的新思路。骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是支持和调节造血细胞定居、增殖、分化、发育和成熟的内环境。另外，预处理导致的造血微环境(Hematopoietic inductive microenvironment,HIM)损伤是allo-BMT造血损伤和免疫功能降低，甚至移植失败的重要原因之一。目的：通过CTLA4Ig-重组腺病毒载体(recombinant adenovirus encoding CTLA4IgcDNA,Ad-CTLA4Ig)转染BMSCs，探讨目的蛋白CTLA4Ig诱导T细胞特异性耐受的可能性及其分子机制，探讨CTLA4Ig基因修饰的BMSCs促进移植后造血重建的可能性。方法：按感染复数(mutiplicity of infection,MOI)为50以Ad-CTLA4Ig<WP=9>转染BMSCs，以RT-PCR检测目的基因转录，免疫组织细胞化学方法检测目的蛋白CTLA4Ig的表达及其在BMSCs中的定位，蛋白印迹(Dot-ELISA)检测不同时相培养上清中的目的蛋白CTLA4Ig，以确定其表达时相，利用亲和层析的方法纯化培养上清中的CTLA4Ig，加入到混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)体系中，通过MTT显色观察其抑制淋巴细胞增殖的生物学效应，以ELISA检测体系中IL-2的水平。以3H-TdR标记的骨髓单个核细胞(mononuclear,MNC)进行细胞黏附实验，通过测定黏附MNC的cpm值，观察CTLA4Ig基因修饰的BMSCs对MNC的黏附力变化。另外，通过BMSCs支持CD34+扩增的细胞总数及集落形成细胞数(colony forming cell,CFC)的变化，比较转染和未转染BMSCs在支持CD34+细胞扩增方面的差异。 结果：1.RT-PCR在转染组及转染后传两代BMSCs中检测到CTLA4Ig基因的转录；免疫组织细胞化学染色示CTLA4Ig表达阳性率达85%(MOI=50)，弥漫性定位于细胞浆；转染后12h Dot-ELISA即可检测到培养上清CTLA4Ig呈阳性，72h即达高峰，传一代培养上清中仍可检测到。2. 纯化的CTLA4Ig对MLR反应体系中淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用，且在一定范围内与CTLA4Ig的浓度呈依赖性关系；体系中IL-2水平与淋巴细胞数有相似的变化趋势，且成正相关(r=0.8522)；CTLA4Ig组的淋巴细胞数与IL-2水平与对照组相差显著(P<0.05)。3.转染组与对照组BMSCs对MNC的黏附力无显著差异(P>0.05)，支持CD34+细胞扩增的能力也无显著差异(P>0.05)。结论：1. Ad-CTLA4Ig 能有效转染BMSCs，BMSCs是基因治疗的良好靶细胞；2. 转染后BMSCs表达的目的蛋白CTLA4Ig能有效阻断B7/CD28共刺激信号途径，从而抑制T细胞活化，抑制IL-2的产生。3. 免疫磁珠阳性选择能获取高纯度CD34+细胞。4.按MOI为50以Ad-CTLA4Ig转染BMSCs，对BMSCs的黏附及支持造血功能无明显影响。