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浅色黄姑鱼(Nibea coibor)是近年来我国东南沿海兴起的具有养殖前景的名特鱼类,适合于海水网箱集约化养殖,是近几年来才发展起来的新品种,该养殖品种深受广大养殖户欢迎,有望成为我国重要的养殖品种之一。目前,浅色黄姑鱼养殖主要依靠投喂鲜活饵料,缺乏相应的配合饲料。因此,研究浅色黄姑鱼的营养需求,开发营养均衡、成本经济以及环境友好的商业配合饲料,对浅色黄姑鱼人工养殖进一步发展具有重要意义。脂类作为三大能源物质之一,可比等量的蛋白质和碳水化合物提供更多的能量,它不仅可以为水产动物提供能量和必需脂肪酸,同时也是脂溶性维生素的载体并在维持细胞生物膜结构中起重要作用。饲料中多种因素均会影响鱼类对脂肪的利用,如脂肪源、动植物油替代、脂肪氧化、功能性脂肪酸等。因此,本文主要围绕浅色黄姑鱼的脂类营养生理展开工作,采用酶学、生理生化学和分子生物学等方法,分析不同脂肪源、不同棕榈油水平、不同共轭亚油酸添加量以及不同氧化鱼油和维生素E水平对浅色黄姑鱼生长性能、体成分、脂肪酸组成、脂类代谢和肝脏抗氧化等相关指标的影响,为浅色黄姑鱼人工配合饲料的研发提供参考数据。同时,克隆浅色黄姑鱼延长酶5(ELOVL5)基因全长并研究n-3HUFA水平对浅色黄姑鱼肝脏ELOVL5mRNA相对表达的影响,在基因层面初步探讨浅色黄姑鱼的 HUFA合成能力,为海水鱼类的相关研究工作提供依据。本实验具体结果如下: 1.不同脂肪源饲料对浅色黄姑鱼的影响 本实验分别添加鱼油、豆油、亚麻油、玉米油、菜籽油和棕榈油作为脂肪源, 以研究饲料中不同脂肪源对浅色黄姑鱼生长性能、饲料利用和脂肪酸组成的影响。鱼油的增重率(WG)和特定生长率(SGR)显著高于棕榈油、豆油、玉米油和菜籽油组(P<0.05),和亚麻籽油组无显著差异(P>0.05)。鱼油和亚麻油组的饲料系数(FC)显著低于其它各组(P<0.05)。不同脂肪源对全鱼蛋白质、水分和灰分无显著性影响(P>0.05),鱼油组和亚麻油组的肝脏脂肪显著低于豆油、玉米油、菜籽油和棕榈油组(P<0.05),鱼油组的肌肉脂肪含量显著高于豆油组、菜籽油组、玉米油组(P<0.05)。饲料脂肪源对浅色黄姑鱼肌肉脂肪酸组成影响显著,各组浅色黄姑鱼的脂肪酸组成反应了对应饲料组的脂肪酸组成特征(P<0.05)。 2.不同棕榈油替代水平对浅色黄姑鱼的影响 本实验配制6组等氮等能饲料,分别用棕榈油替代0%、20%、40%、60%、80%和100%的鱼油,研究饲料中棕榈油替代鱼油对浅色黄姑鱼生长性能、体成分、脂肪酸组成、脂类代谢和肝脏抗氧化状态的影响。8PO和10PO组的WG和SGR显著低于其余各组(P<0.05)。FC,摄食量(FI),肥满度(CF)和肝体比(HSI)受饲料中棕榈油水平的影响不显著(P>0.05)。10PO组肝脏脂肪含量显著高于FO组和2PO组。饲料中棕榈油水平对浅色黄姑鱼全鱼的体成分和肌肉脂肪影响均不显著(P>0.05)。随着饲料中棕榈油替代水平的升高,肝脏和肌肉中C16:0、C18:1n-9、C18:2n-6和C18:3n-3显著上升,n-3 HUFA如20:5n-3、22:5n-3、22:6n-3以及n-3/n-6比值显著下降(P<0.05)。8PO和10PO组血清溶菌酶(LSZ)显著低于其它各组(P<0.05)。肝脏肝脂酶(HL)和脂蛋白酯酶(LPL)活性呈下降趋势,胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)均呈上升趋势,但各组之间无显著差异(P>0.05)。肝脏中的a-生育酚(a-tocopherol)含量随棕榈油替代水平上升显著升高,而肝脏丙二醛(MDA)含量则显著下降(P<0.05)。肝脏总抗氧化力(t-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)在8PO组和10PO组显著高于FO组。多项式回归分析表明,棕榈油替代量在24.2%时有最大特定生长率,而实验结果表明棕榈油替代60%鱼油对浅色黄姑鱼生长无显著负面影响。 3.不同水平的氧化鱼油与维生素E对浅色黄姑鱼的影响 本实验中鱼油的POV值共设3个水平,分别为新鲜鱼油(POV=6.5meq kg-1)、中度氧化(POV=75meq kg-1)、高度氧化(POV=150meq kg-1);维生素E共设两个水平,分别为0mg kg-1和200mg kg-1,交互设计共6个处理组。浅色黄姑鱼的WG和SGR均随着饲料中POV值的升高而显著降低(P<0.05)。全鱼蛋白和脂肪随着饲料中POV值的升高而显著降低,肝脏脂肪随着饲料中POV值的升高而显著上升(P<0.05)。随着鱼油POV值的升高,肝脏中SFA、MUFA显著上升(P<0.05),n-3HUFA显著下降(P<0.05),血清GOT、肝脏HL和LPL活性均显著降低(P<0.05),CHO和TG显著上升(P<0.05)。饲料中的鱼油POV值对浅色黄姑鱼肝脏中的抗氧化指标影响显著(P<0.05)。维生素E水平对WG、SGR、HSI、全鱼脂肪和肝脏脂肪含量均有显著影响(P<0.05)。随着维生素E含量的升高,C14:0、C20:4n-3显著下降(P<0.05),C20:5n-3、C22:5n-3和C22:6n-3含量显著上升(P<0.05)。维生素E水平对LSZ、GOT、GPT、CHO和TG均有显著影响(P<0.05)。随着维生素E水平的升高,MDA显著下降,a-生育酚、SOD、CAT、GSH-Px和T-AOC显著上升(P<0.05)。 4.不同共轭亚油酸添加水平对浅色黄姑鱼的影响 本实验中分别添加0%、0.5%、1%、1.5%和2%的共轭亚油酸(,CLA),分别标注为C0、C0.5、C1.0、C1.5和C2。浅色黄姑鱼的WG和SGR受饲料CLA水平影响不显著(P>0.05)。全鱼脂肪和肝脏脂肪在C2.0组显著低于对照组、C0.5和C1.0组(P<0.05),而肌肉脂肪含量在C1.5和C2.0组显著低于对照组、C0.5和C1.0组(P<0.05)。饲料CLA水平对肌肉和肝脏脂肪酸组成均有显著影响(P<0.05)。随着饲料CLA水平的升高,肝脏HL、LPL、血清LSZ活性以及免疫球蛋白M(IgM)含量显著上升(P<0.05),血清TG显著下降(P<0.05)。肝脏SOD、CAT和t-AOC受CLA水平影响显著上升,MDA含量显著下降(P<0.05)。 5.浅色黄姑鱼脂肪酸延长酶5(ELOVL5)基因全长的克隆及其表达分析根据海水鱼类脂肪酸延长酶5保守序列设计引物,采用RT-PCR和RACE技术克隆得到浅色黄姑鱼脂肪酸延长酶5(ELOVL5)基因全长(GenBank登录号:KX158842)。对ELOVE5进行分析,该基因cDNA全长1315bp,开放阅读框(ORF)为885bp(包括终止密码子),编码294个氨基酸,编码的蛋白序列含有一个高度保守的氧化还原中心组氨酸簇HXXHH,4个保守区(KLIEFMDT、QITFLHIYHH、NSFVHVVMYSYY、TQLQLVQ),7个跨膜区(分别位于37-50,63-85,110-132,139-161,176-198,205-227和231-250号氨基酸)和内质网停留信号(KKXR)。实验结果表明,随着饲料中棕榈油水平的上升,饲料中n-3 HUFA水平逐渐下降,浅色黄姑鱼肝脏ELOVL5的表达量显著提高(P<0.05)。