论文部分内容阅读
目的:宫颈癌由于其高发病率和和转移率一直在女性恶性肿瘤中占据一席之地,明确宫颈癌细胞的转移扩散机制对于其临床策略的探索有着非比寻常的意义。细胞内氯离子通道蛋白1(chloride intracellular channel 1,CLIC1)在恶性肿瘤进展过程中发挥的作用已被国内外多项研究所证实,但具体功能和机制仍不清楚。畸形血管系统是恶性肿瘤所具有的普遍特征,这种异常的血管系统使得肿瘤细胞周围生长环境发生慢性改变,最终形成一种长期持续的缺氧-再加氧(hypoxia-reoxygenation,H-R)环境。而这一转变所带来的最直接的结果就是肿瘤细胞中活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)的提升,肿瘤细胞的恶性表型在ROS作用下发生转变,进一步加速肿瘤的恶性进展过程。本研究观察缺氧-再加氧环境中CLIC1对宫颈癌SiHa细胞内ROS水平的影响,进而对宫颈癌的进展机制进行探讨。方法:通过物理条件构建宫颈癌SiHa细胞H-R模型和常氧模型;对不同培养环境中的SiHa细胞给予IAA94(CLIC1特异性抑制剂,20μmol/L)、DPI(NADPH氧化酶抑制剂,15μmol/L)、NAC(抗氧化剂,20 mmol/L)药物处理,各组细胞中CLIC1蛋白的相对表达量通过Western-blot方法检测;不同药物处理后SiHa细胞内ROS含量使用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针试剂盒检测;利用划痕实验及细胞侵袭实验观察常氧及H-R条件下各组细胞迁移及侵袭能力的改变。获取数据通过SPSS22.0软件完成最终分析处理。结果:1.Western-blot方法测得H-R组CLIC1蛋白的相对表达量(3.57±0.03)显著高于常氧组(1.00±1.18)(P<0.01),H-R+IAA94组细胞中CLIC1蛋白的相对表达量(2.39±0.01)明显低于H-R组(3.57±0.03)(P<0.01),H-R+DPI组和H-R+NAC组细胞中CLIC1蛋白的相对表达量(2.83±0.03、2.85±0.02)明显低于H-R组(3.57±0.03)(P<0.01)。2.荧光探针技术检测各组SiHa细胞内ROS含量的结果显示,相对于常氧组,缺氧再加氧条件下培养的SiHa细胞内ROS的相对含量出现增加(P<0.01),而与H-R组相比,H-R+IAA94组细胞内ROS的相对含量则出现了降低(P<0.01),H-R+DPI组和H-R+NAC组细胞内ROS的相对含量也低于H-R组(P<0.01)。3.细胞划痕实验测得H-R组SiHa细胞的划痕愈合面积(61.76±0.52)明显高于常氧组(41.94±1.18)(P<0.01),H-R+IAA94组细胞的划痕愈合面积(50.53±3.18)低于H-R组(61.76±0.52)(P<0.01),H-R+DPI组和H-R+NAC组细胞的划痕愈合面积(49.34±2.15、49.21±3.13)明显低于H-R组(61.76±0.52)(P<0.01)。4.细胞侵袭实验结果表明相比于常氧组(46.60±6.19),H-R组SiHa细胞的侵袭个数(91.80±10.96)明显增多(P<0.01),H-R+IAA94组细胞的侵袭个数(69.20±9.88)较H-R组(91.80±10.96)较少(P<0.01),H-R+DPI组和H-R+NAC组细胞的侵袭个数(65.20±9.58、64.40±6.80)也明显少于H-R组(91.80±10.96)(P<0.01)。结论:CLIC1在缺氧-再加氧环境中可通过上调细胞内ROS参与宫颈癌SiHa细胞的迁移和侵袭过程,促进宫颈癌进展。以CLIC1和ROS作为相关药理学靶点的临床策略可能为宫颈癌治疗提供希望。